2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、細胞因子是一類由免疫細胞及其它類型細胞合成或分泌的高活性、多功能的小分子蛋白質(zhì)物質(zhì),能調(diào)節(jié)多種細胞的生理功能。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和干擾素γ(Interferonγ,IFNγ)在免疫功能和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用,均為多效應(yīng)的細胞因子。為了研究草魚TNF-α和IFNγ的分子結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì),本課題克隆獲得草魚TNF-α和IFNγ2的cDNA全長序列,然后分別將其成熟肽克隆至pET30a

2、(+)載體,構(gòu)建BL21(DE3)-pET30a(+)-TNF-α和BL21(DE3)-pET30a(+)-IFNγ2原核表達系統(tǒng)。通過優(yōu)化誘導(dǎo)表達條件,獲得較高產(chǎn)量的可溶性重組蛋白,經(jīng)過鎳螯合柱親和層析后進行分子篩層析,得到高純度的重組草魚TNF-α蛋白(rgcTNF-α)和重組草魚IFNγ2蛋白(rgcIFNγ2)。利用重組蛋白純品刺激草魚頭腎白細胞,Real-time PCR分析顯示rgcTNF-α能明顯誘導(dǎo)NF-κB信號通路中相

3、關(guān)因子的mRNA表達水平,且western blot分析顯示rgcTNF-α能調(diào)節(jié)IκBα磷酸化狀態(tài),而rgcIFNγ2則能有效促進LPS誘導(dǎo)的IL-1β mRNA表達水平,從而對此兩種重組蛋白功能活性進行初步探討。
  本課題從分子克隆、序列分析、重組表達、蛋白純化及活性鑒定等不同層面研究草魚TNF-α和IFNγ2的分子結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì),比較系統(tǒng)地闡明它們在魚類免疫系統(tǒng)中的功能地位,不僅為深入研究它們在免疫進化過程中的結(jié)構(gòu)和功能演

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