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文檔簡介
1、目的:探討細胞因子IL-1β,TNF-α和IFN-γ在不同濃度下對介導表皮葡萄球菌生物膜形成的胞間多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)主要合成基因icaA及icaD表達的影響,探索免疫細胞因子與表皮葡萄球菌感染的關(guān)系,為臨床治療表皮葡萄球菌感染及藥物的合理應用提供新思路。
方法:在細胞因子培養(yǎng)下,采用PCR法擴增生物膜形成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因icaA,icaD及管家基因g
2、yrB。同時采用SYBR Green1 熒光RT-PCR(Fluorescence ReverseTranscriptase-PCR)半定量法檢測上述培養(yǎng)環(huán)境下形成生物膜的主要結(jié)構(gòu)基因icaA及icaD在細胞對數(shù)生長中期的表達的變化。
結(jié)果:PCR 擴增可見sep1 菌株生物膜結(jié)構(gòu)基因icaA和icaD 同時表達,并可見管家基因gyrB的條帶。SYBR Green1 熒光RT-PCR檢測顯示,在IL-1β影響下,icaA及
3、icaD改變不明顯,TNF-α和IFN-γ可下調(diào)icaD的表達,在TNF-α濃度為100ng/ml時達到最大抑制狀態(tài),在IFN-γ濃度為10ng/ml,icaD基因的表達最低。三種細胞因子對icaD基因的表達在統(tǒng)計學上有顯著差異F=10.753,P<0.05;而對icaA的表達在統(tǒng)計學上無顯著性差異F=0.443,P>0.05。
結(jié)論:IL-1β對表皮葡萄球菌(sep)生物膜結(jié)構(gòu)基因icaA及icaD 影響不明顯,而TNF
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