氨溴索對表皮葡萄球菌生物膜結(jié)構(gòu)破壞和殺菌作用的研究.pdf

1、第一部分表皮葡萄球菌生物膜體外模型的建立和分析
　　 【目的】建立體外表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)生物膜(biofilm，BF)模型，觀察和定量分析表皮葡萄球菌BF的動(dòng)態(tài)形成過程。
　　 【方法】采用可形成BF的表皮葡萄球菌RP62A，平板法建立體外BF模型，四唑鹽(tetrazolium salt，XTT)減低法定量檢測BF形成過程中細(xì)菌活力的變化，激光共聚焦顯微鏡(confoc

2、al laser scanningmicroscopy，CLSM)結(jié)合圖像結(jié)構(gòu)分析軟件(image structure analyer，ISA)對BF形成過程結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，掃描電鏡(scanning electronmicroscope，SEM)觀察BF形成過程中的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　 【結(jié)果】表皮葡萄球菌能夠在玻片上形成典型的BF，在12h、24h和48 h時(shí)，XTT減低法A450的值分別為2.39±0.48、3.41±0

3、.18和3.92±0.27，P＜0.05；ISA軟件定量分析顯示區(qū)域孔徑(areal porosity，AP)的值分別0.84±0.08、0.68±0.01和0.59±0.13，P＜0.05，平均擴(kuò)散距離(average diffusion distance，ADD)的值分別為1.34±0.24、1.49±0.09和1.89±0.39，P＜0.05，結(jié)構(gòu)熵(textual entropy，TE)的值分別為4.71±0.82、8.69±0

4、.68和8.94±0.28，24 h、48h與12 h相比，P＜0.05。掃描電鏡可見24h時(shí)表皮葡萄球菌成團(tuán)聚集，菌體外有少量胞外物質(zhì)包裹。48小時(shí)細(xì)菌數(shù)目明顯增加，聚集更加密集，胞外物質(zhì)分泌明顯增多。
　　 【結(jié)論】平板法能夠成功的建立表皮葡萄球菌BF模型，BF的形成是個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，24 h時(shí)BF基本形成，48 h BF結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜。XTT減低法、CLSM結(jié)合ISA軟件、SEM三種方法聯(lián)合使用是觀察和定量分析體外BF模型較理

5、想的方法。
　　 第二部分氨溴索對表皮葡萄球菌生物膜結(jié)構(gòu)破壞和殺菌作用
　　 【目的】探討氨溴索對表皮葡萄球菌生物膜結(jié)構(gòu)和膜內(nèi)菌的影響。
　　 【方法】平板法培養(yǎng)表皮葡萄球菌RP62A24h，得到成熟BF，不同濃度的氨溴索作用24小時(shí)后，用掃描電鏡(scanning electronmicroscope，SEM)觀察BF的形態(tài)結(jié)構(gòu)；激光共聚焦顯微鏡(confocallaser scanning microscop

6、y，CLSM)結(jié)合BF圖像結(jié)構(gòu)分析軟件(imagestructure analyer，ISA)對BF結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行分析；四唑鹽(XTT)減低法檢測氨溴索對BF內(nèi)細(xì)菌的殺滅作用。
　　 【結(jié)果】氨溴索處理以后，電鏡觀察可見1.875 mg/ml氨溴索處理組BF結(jié)構(gòu)被破壞，僅見少量散在細(xì)菌。ISA軟件定量分析顯示：1.875 mg/ml氨溴索處理組和對照組的BF厚度分別為(27.95±5.93)μm和(9.76±1.29)μm，t=7

7、.955，P＜0.05；平均擴(kuò)散距離(average diffusiondistance，ADD)分別為2.173±0.219和1.625±0.092，t=5.640，P＜0.05；結(jié)構(gòu)熵(textual entropy，TE)分別為7.706±0.610和5.488±0.747，t=5.633，P＜0.05；區(qū)域孔率(areal porosity，AP)分別為0.772±0.036和0.889±0.063，t=-4.322，P＜0.0