脫管散對金黃色葡萄球菌生物膜抑制及破壞作用的體外研究.pdf

1、目的:探索適宜的金黃色葡萄球菌生物膜（S.aureus BF）建模方法，為研究脫管散對其干預作用提供模型,探討脫管散對S.aureus BF的抑制破壞作用。
　　方法:將金黃色葡萄球菌（ATCC25933）細菌進行復蘇、接種、傳代、培養(yǎng)等制成濃度為1.5×109cfu/ml的標準菌液。24孔板培養(yǎng)番紅染色法初步定性S.aureus BF的形成。以直徑8mm細胞爬片為載體，用LB肉湯培養(yǎng)，每日換液，4日后掃描電鏡觀察進一步明確菌株能

2、夠形成BF，不同倍數(shù)下S.aureus BF行形態(tài)學觀察。以直徑8mm細胞爬片為載體用4種不同濃度脫管散作用于成熟的BBF4天后，確定脫管散對S．a(chǎn)ureus BF作用的適宜濃度。分為空白組、脫管散不同濃度組，于建模3d開始使用脫管散，用藥4d后采用連續(xù)活菌計數(shù)法測定活菌數(shù)量，行統(tǒng)計學分析。以直徑8mm細胞爬片為載體掃描電鏡動態(tài)觀察S.aureus BF6d的生長趨勢及每天使用萬古霉素(VAN)作用后的對BF的影響。然后分為空白組和萬古

3、霉素組后結(jié)晶紫染色，酶標儀動態(tài)測定光密度值繪制 S.aureus BF生長曲線及 VAN作用后的生長曲線。分為空白組、萬古霉素組、脫管散組，以細胞爬片為載體，24孔板培養(yǎng)以第4天、第7天按需留取標本，經(jīng)處理后掃描電鏡觀察對比VAN、脫管散對 S.aureus BF生成的抑制作用。分為空白組、中西結(jié)合組（萬古霉素組聯(lián)合脫管散）、脫管散組，以細胞爬片為載體，24孔板培養(yǎng)，各組自48h后開始用藥，在用藥后第4天、第7天按需留取標本，經(jīng)處理后掃

4、描電鏡觀察對比中西結(jié)合、脫管散對成熟S.aureus BF的破壞作用。
　　結(jié)果:
　　1.采用24孔板對S.aureu s培養(yǎng)4天后行番紅染色形成肉眼可見的片狀紅色物質(zhì)初步定性為生物膜形成。
　　2.以細胞爬片為載體，培養(yǎng)4天后，經(jīng)沖洗去除浮游菌、乙醇梯度脫水、醋酸異戊酯置換、二氧化碳臨界點干燥儀進行二氧化碳臨界點干燥、粘臺、HCP-2離子濺射儀噴金等處理后行掃描電鏡檢測，可見膜狀BBF的形成，并在不同倍數(shù)下觀察生物

5、膜的形態(tài)。
　　3.脫管散對S.aureus BF作用的最適濃度：對成熟的S.aureus BF使用脫管散4d后，0.1g/ml濃度組細菌數(shù)量較少且無生物膜形成。
　　4.脫管散對S.aureus BF作用后的連續(xù)活菌計數(shù)比較：在使用不同濃度脫管散4天后，連續(xù)活菌計數(shù)，脫管散不同濃度組活菌數(shù)量明顯少于空白對照組。
　　5.S.aureus BF生長趨勢及萬古霉素(VAN)作用后的影響：掃描電鏡及酶標儀測光密度值，動態(tài)觀

6、察空白組S.aureus BF自第1天開始增多，到第4天達高峰后又開始逐漸減少，萬古霉素組在使用萬古霉素后第1天BBF迅速增加到頂峰，之后逐漸下降，細菌生物膜逐漸減少。
　　6.脫管散對S.aureus BF的抑制作用：無論培養(yǎng)4天、還是7天，萬古霉素組都有生物膜存在，但7天時量較少；脫管散組均無生物膜存在，且細菌數(shù)量稀少。
　　7.脫管散對S.aureus BF的破壞作用:對成熟的S.aureus BF中西結(jié)合組在用藥后4