銀屑病BMSC的生物學(xué)特性及與外周血相比IFN-γ，TNF-α水平的變化.pdf

1、銀屑病是一種多基因遺傳背景下內(nèi)外因素失衡導(dǎo)致的慢性炎癥性皮膚病[1]，盡管目前對許多觸發(fā)銀屑病發(fā)生的確切機制仍未闡明，大量臨床及實驗研究顯示T淋巴細胞在銀屑病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[2]。國內(nèi)外研究表明銀屑病的免疫異常不僅涉及T淋巴細胞，而且其它多種血細胞如B細胞、單核細胞、中性粒細胞甚至紅細胞及血小板的數(shù)量及活性異常均參與銀屑病發(fā)病[3]，由于所有血細胞均來源于骨髓，國內(nèi)學(xué)者首先提出骨髓的異常在銀屑病發(fā)病中起到重要作用。最近一些研究主

2、要集中于銀屑病患者骨髓造血干細胞的生物學(xué)活性，但對銀屑病患者骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cell，BMSC)的生物學(xué)特性及由其分化來的骨髓基質(zhì)細胞所組成的造血微環(huán)境是否存在異常罕見報道。 目的: 研究銀屑病患者BMSC的細胞形態(tài)，表面標志和生長曲線等生物學(xué)特性，檢測銀屑病患者外周血和骨髓中造血抑制因子IFN-γ，TNF-α水平，及IFN-γ,TNF-α水平與病情活動程度，病程的關(guān)系，試圖

3、探討銀屑病患者BMSC有無異常，骨髓微環(huán)境的改變及其在銀屑病發(fā)病中的可能作用。 方法： 密度梯度離心法分離培養(yǎng)骨髓單個核細胞，貼壁純化法得到BMSC，鏡下觀察BMSC形態(tài)，密度，生長情況，流式細胞儀鑒定BMSC表面抗原，MTT法繪出生長曲線。設(shè)立對照組用雙抗體夾心(ELISA)法分別檢測銀屑病患者外周血血漿，外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)培養(yǎng)上清，骨髓上清

4、液及骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ，TNF-α水平，采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。銀屑病外周血，骨髓IFN-γ，TNF-α水平與PASI評分和病程之間進行相關(guān)分析(Spearman Rank Order Correlation)。 結(jié)果： 正常對照和銀屑病患者BMSC原代細胞在細胞形態(tài)上無明顯差異，但銀屑病組骨髓細胞貼壁晚，融合速度慢，培養(yǎng)時間長。傳代后細胞形態(tài)沒有顯示出差異。經(jīng)鑒定兩者BMSC細胞表面CD2

5、9表達均為陽性，CD34，CD45表達均為陰性。從生長曲線上可以看出，銀屑病患者BMSC P2代第4d起較正常對照表現(xiàn)出較低的增殖活性。與正常人相對照，銀屑病外周血血漿，PBMC培養(yǎng)上清，骨髓上清液及骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)上清中造血抑制因子IFN-γ水平明顯升高，而TNF-α除在骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)上清沒有差異(P>0.05)，在其余三組中的水平都較對照組升高。 結(jié)論： 1銀屑病患者BMSC細胞顯示出較低的增殖活性，BMSC的形態(tài)