攜帶抑瘤基因IL-24的rDNA區(qū)靶向載體構(gòu)建及抑瘤效果的初步驗(yàn)證.pdf

1、中圖分類號(hào)UDC碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級(jí)攜帶抑瘤基因IL24的rDNA區(qū)靶向載體構(gòu)建及抑瘤效果的初步驗(yàn)證ConstructionofrDNATargetingVectorCarr“TumorSnGeneIL一‘a(chǎn)ndcarryinglumorSuppressorene24and—PreliminaryVerificationfortheInhibitoryEffect作者姓名：寸金濤學(xué)科專業(yè)：遺傳學(xué)學(xué)院(系、所)：醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)

2、室導(dǎo)師：梁德生教授指導(dǎo)小組：劉雄吳副教授鄔玲仟教授夏家輝院士論文答辯日期塑墾：墨：塹答辯委員會(huì)主中南大學(xué)二。一三年五月碩士學(xué)位論文中文摘要攜帶抑瘤基因IL24的rDNA區(qū)靶向載體構(gòu)建及抑瘤效果的初步驗(yàn)證摘要近年來(lái)，隨著人類對(duì)腫瘤免疫、腫瘤病因及分子機(jī)制等研究的深入，腫瘤基因治療獲得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，并逐漸走向成熟，獲準(zhǔn)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的基因治療藥物逐年增多。其中載體和治療基因的選擇是其成功的關(guān)鍵；目前大部分基因治療研究的載體都集中于病毒載體

3、，我室從對(duì)雙隨體小染色體的研究出發(fā)，構(gòu)建了一種非病毒人源基因載體系統(tǒng)——核糖體基因區(qū)靶向載體(pHrneo)，其后又改進(jìn)構(gòu)建了pHr2載體系統(tǒng)。我們前期研究結(jié)果表明該載體系統(tǒng)能在細(xì)胞內(nèi)安全且穩(wěn)定表達(dá)外源基因。IL一24是一個(gè)既能抑制腫瘤生長(zhǎng)，又可調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的基因。多項(xiàng)研究顯示IL24具有廣泛的抗腫瘤作用，所以利用該載體結(jié)合IL24可能會(huì)是腫瘤基因治療的一個(gè)新策略。目的：以pHrneo和pHr2兩個(gè)載體構(gòu)架為基礎(chǔ)，構(gòu)建能在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)

4、有生物學(xué)活性的工L一24蛋白的核糖體基因區(qū)靶向載體，并擬利用該載體對(duì)腫瘤的基因治療進(jìn)行探究。方法：1載體的構(gòu)建：PCR分別擴(kuò)增IL一24基因、CMV啟動(dòng)子和CAG啟動(dòng)子后連入pEGFP—N1質(zhì)粒，構(gòu)成與EGFP融合或者非融合表達(dá)框，再分別連入pHrneo和pHr2構(gòu)架，構(gòu)建出分別以CMV和CAG為啟動(dòng)子的兩套質(zhì)粒。2構(gòu)建完成的質(zhì)粒用磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，觀察熒光表達(dá)情況并通過(guò)ELISA檢測(cè)IL一24蛋白的表達(dá)情況。3G418篩選轉(zhuǎn)