A33啟動子介導的溶瘤腺病毒攜帶IL-24對結腸襄癌的抗癌作用研究.pdf

1、隨著社會的發(fā)展和科學的進步,很多疾病已經(jīng)能夠治愈,惡性腫瘤則成為人類致死的頭號殺手,是國際科研領域內(nèi)投入最多、研究最深入的疾病之一。結直腸癌(Colorectal cancer,CRC)作為人類高發(fā)惡性腫瘤,其發(fā)病率一直呈上升趨勢。在我國,結直腸癌死亡率已位于惡性腫瘤死亡率的第五位,嚴重危害人類健康。
　　 2001年,劉新垣院士提出的“癌癥的靶向基因-病毒治療”這一新型腫瘤治療策略,不僅解決了病毒在腫瘤內(nèi)特異性增殖問題,而且融

2、合了治療基因協(xié)同殺傷腫瘤的雙重優(yōu)勢。溶瘤腺病毒載體的靶向性和攜帶出色的腫瘤治療基因是該策略發(fā)揮最佳療效的關鍵。腺病毒復制最重要的元件是其E1區(qū),特別是E1A區(qū),本課題正是利用改造E1A區(qū)序列,將E1A CR2區(qū)的24bp(△24)堿基刪除,則E1A(△24)蛋白質(zhì)不能與Rb結合,抑制了細胞周期并促進病毒在腫瘤細胞中選擇性地復制。黑色素瘤分化相關基因-7/白介素-24(mda-7/IL-24)作為一種出色的腫瘤治療基因,具有多功能調(diào)節(jié)并誘

3、導癌癥細胞死亡的作用,由于它對腫瘤殺傷選擇性高并對正常細胞沒有毒害的特點而被用于本課題中。
　　 研究發(fā)現(xiàn),人胃腸道上皮細胞表面的一種跨膜糖蛋白A33抗原具有很高的腸組織特異性,它已成為臨床上單抗靶向治療結腸癌研究的熱點,而進一步研究其基因表達調(diào)控就有重要意義。這不僅可以從分子水平上闡明A33基因組織特異表達的機理,而且通過此研究還能為結腸癌基因靶向治療提供一種新思路。
　　 本課題首先構建一個由A33啟動子調(diào)控的雙靶向

4、結腸癌特異性增殖溶瘤腺病毒載體Ad.A33-E1A(△24),再在此基礎上攜帶一個抗癌基因IL-24,構成我們策略中提到的靶向基因-病毒Ad(IL-24)·A33-E1A(△24),以期能夠取得很好的抗結腸癌效果。實驗結果表明Ad(IL-24)-A33-E1A(△24)有一定的腫瘤殺傷能力,并對正常細胞毒副作用非常小,但對五種結腸癌細胞的殺傷作用并未明顯高于其他四種腫瘤細胞。A33啟動子調(diào)控的重組溶瘤腺病毒Ad(IL-24)-A33-

5、E1A(△24)在感染復數(shù)為10MOI時對腫瘤的殺傷效力并不強,在感染復數(shù)為50MOI時,九種細胞中存活率最低也僅為50％左右。結果也顯示目的病毒Ad(IL-24)-A33- E1A(△24)比載體病毒Ad.A33- E1A(△24)對腫瘤的殺傷作用并沒有明顯增強。結果說明,A33啟動子調(diào)控重組腺病毒體外抗結腸癌特異性不明顯,A33啟動子活性不高。A33啟動子活性及其調(diào)控機制有待進一步研究,從而改進實驗思路,為結腸癌的靶向基因-病毒治療