2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:本研究通過構(gòu)建針對神經(jīng)膠質(zhì)瘤 U251細(xì)胞的溶瘤腺病毒,通過病毒上的 hTERT啟動子調(diào)控腺病毒 E1A自我復(fù)制基因,利用 GFAP啟動子調(diào)控 P53基因;在膠質(zhì)瘤存在的條件下,溶瘤病毒自我復(fù)制出 P53蛋白,實現(xiàn)抗腫瘤的目的,實現(xiàn)靶向性基因治療。
  方法:由上海生物公司構(gòu)建hTERT啟動子引導(dǎo)腺病毒早起蛋白(early region1A,E1A)基因同時GFAP啟動子調(diào)控 P53基因的條件復(fù)制腺病毒。293T細(xì)胞被腺病毒

2、轉(zhuǎn)染后,利用半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量法(Tissue culture infective dose50,TCID50)檢測溶瘤腺病毒滴度,計算病毒感染293T細(xì)胞后的pfu值;用免疫蛋白印跡檢測P53蛋白的表達量;用 MTT法檢測重組腺病毒 Ad-Tp-E1A-Gp-P53對于人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251生長的抑制作用;用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。
  結(jié)果:本實驗用的重組腺病毒 Ad-Tp-E1A-Gp-P53的 TCID50測定結(jié)果為

3、:病毒活性 T(lU/ml):3.2×1011PFU/ml。Western印跡雜交證實了溶瘤腺病毒攜帶的人野生型 P53基因在 U251細(xì)胞中成功表達,隨著MOI增加,其蛋白相對表達量呈逐漸增加趨勢,兩兩之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MTT法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),Ad-Tp-E1A-Gp-P53對腫瘤細(xì)胞都具有明顯的抑制生長的作用(P<0.05);流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果提示隨著 MOI的增加,凋亡率逐漸增加,提示重組腺病毒Ad-

4、Tp-E1A-Gp-P53作用于 U251細(xì)胞組后死亡率明顯高于對照組。
  結(jié)論:hTERT及 GFAP啟動子攜帶 P53的重組條件復(fù)制性腺病毒可大量表達 P53蛋白,作用于腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞后具有比較好的生長抑制的有效性,且對膠質(zhì)瘤細(xì)胞有一定的凋亡作用。它既保留了野生型腺病毒對于哺乳動物細(xì)胞高感染性的特點,又實現(xiàn)了在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的特異性復(fù)制,從而大大降低了其對于周圍正常細(xì)胞的副作用。且重組溶瘤腺病毒 Ad-Tp-E1A-Gp-P5

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