腦膠質(zhì)瘤特異性啟動(dòng)子的構(gòu)建和應(yīng)用.pdf

1、腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)原發(fā)惡性腫瘤,惡性程度高,手術(shù)后易復(fù)發(fā),預(yù)后差,現(xiàn)有治療手段均不能顯著改善該類患者的預(yù)后.由于膠質(zhì)瘤具有原位復(fù)發(fā)的特性使之非常適合基因治療.本課題利用基因克隆技術(shù),構(gòu)建出全長(zhǎng)的GFAP啟動(dòng)子和hTERT啟動(dòng)子,分別連接到含報(bào)告基因的真核表達(dá)載體pGL3-Basic.rAAV基因表達(dá)框的容量?jī)H有5.3kb,因此治療基因選用僅有569bp的促凋亡基因Bax α,構(gòu)建以GFAP/hTERT-Bax α真核表達(dá)載體

2、.體外轉(zhuǎn)染bt325細(xì)胞系,72小時(shí)后EB、丫啶橙染色,膠質(zhì)瘤細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡.本課題成功構(gòu)建了膠質(zhì)細(xì)胞特異性的GFAP和hTERT啟動(dòng)子,體外實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)有效性和特異性,并且有效介導(dǎo)Bax α基因表達(dá),誘導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡;成功構(gòu)建6HRE-GFAP雜合啟動(dòng)子,在低氧環(huán)境可以顯著增強(qiáng)表達(dá),是一個(gè)腦膠質(zhì)瘤特異性的高效啟動(dòng)子,有廣泛的研究應(yīng)用前景;成功構(gòu)建GFAP/hTERT-promoter-Bax α表達(dá)載體,為下一步制備膠質(zhì)細(xì)胞特異性rA