溶瘤腺病毒載體介導(dǎo)siRNA的抗肝癌研究.pdf

1、RNA干擾(RNAi)是由雙鏈小干擾RNA分子(siRNA)介導(dǎo)，在。mRNA水平上的序列特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默過程。該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于人類重大疾病治療領(lǐng)域的研究，是醫(yī)學(xué)生物研究領(lǐng)域內(nèi)的一次重大突破，尤其給腫瘤治療提供了一個(gè)新途徑。運(yùn)用RNAi技術(shù)可以有效沉默癌基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，調(diào)控細(xì)胞周期，抑制腫瘤新生血管生成等；另一方面，RNAi技術(shù)與傳統(tǒng)的化療、放療相結(jié)合，更具抗癌潛力。 然而，早期使用的化學(xué)合成雙鏈siRNA經(jīng)脂質(zhì)

2、體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞的效率極其低下且極不穩(wěn)定。最新研究資料發(fā)現(xiàn)病毒可作為介導(dǎo)siRNA的載體且轉(zhuǎn)染效率高、體內(nèi)療效顯著，因此病毒漸漸成為應(yīng)用最廣泛的siRNA載體。病毒載體通常在PolⅢ啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下表達(dá)發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA(shRNA)，然后經(jīng)核酸酶RnaseⅢ家族中的Dicer酶切割成長(zhǎng)約21bp的雙鏈siRNA，最終特異性切割mRNA。目前使用的病毒載體包括慢病毒、桿狀病毒、腺相關(guān)病毒以及非復(fù)制性腺病毒等，但是這些載體都缺乏腫瘤靶向性，嚴(yán)重

3、阻礙了 RNAi技術(shù)在腫瘤治療中的進(jìn)一步應(yīng)用。最近腫瘤特異性復(fù)制的腺病毒載體(溶瘤腺病毒)引起了人們廣泛關(guān)注，因?yàn)樵擃愝d體不僅具有腫瘤靶向性，而且可以通過腫瘤選擇性復(fù)制溶解和殺滅癌細(xì)胞，并且對(duì)正常細(xì)胞毒副作用較小。因此這類載體將有望被開發(fā)為新型的腫瘤靶向性siRNA載體。本課題采用溶瘤腺病毒載體攜帶沉默X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)的shRNA用于腫瘤治療。 XIAP是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中最有效力的caspase抑制物，

4、也是分子結(jié)構(gòu)研究得最清楚的IAP家族成員。XIAP在絕大多數(shù)的癌細(xì)胞過表達(dá)，尤其在肝癌中。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL)是近年發(fā)現(xiàn)的TNF超家族新成員，該蛋白能選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡，而赦免正常組織和細(xì)胞。而XIAP高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)產(chǎn)生明顯的耐受現(xiàn)象。本課題采用溶瘤腺病毒載體同時(shí)表達(dá)靶向沉默XIAP的shRNA和T