腺病毒載體介導(dǎo)的靶向性腫瘤基因治療研究.pdf

1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文腺病毒載體介導(dǎo)的靶向性腫瘤基因治療研究姓名：毛晨宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：滕理送20090501浙江大學(xué)博l：學(xué)位論文中文摘要第一部分：雙重調(diào)控的靶向性腫瘤增殖腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究。本課題引入兩個(gè)在絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中均高表達(dá)而在正常組織中低表達(dá)甚至不表達(dá)的腫瘤特異性啟動(dòng)子人端粒酶催化亞單位啟動(dòng)子和人環(huán)氧合酶一2啟動(dòng)子來(lái)分別調(diào)控腺病毒早期必需基因E1A和E1B，使經(jīng)過(guò)改造的重組增殖腺病毒只能在同

2、時(shí)表達(dá)人端粒酶和人環(huán)氧合酶一2的細(xì)胞內(nèi)增殖并裂解該細(xì)胞，而在正常的細(xì)胞內(nèi)不能有效增殖。在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)將腺病毒穿梭質(zhì)粒載體pD306／H181一C409和骨架質(zhì)粒載體pBHGE3共轉(zhuǎn)染工具細(xì)胞Hek293，經(jīng)過(guò)在細(xì)胞內(nèi)隨機(jī)同源重組后，成功得到了一種新型的由人端粒酶催化亞單位啟動(dòng)子和人環(huán)氧合酶一2啟動(dòng)子共同調(diào)控的條件增殖型腺病毒Ad5HC。通過(guò)Westernblot法檢測(cè)表明EIA和E1B可在多種被Ad5HC作用后的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，而在正

3、常細(xì)胞中不表達(dá)；病毒增殖試驗(yàn)表明Ad5一HC可在多種腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量擴(kuò)增，其擴(kuò)增倍數(shù)是正常細(xì)胞的上萬(wàn)倍；細(xì)胞殺傷試驗(yàn)表明Ad5一HC對(duì)多種不同類型的腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)大的殺傷效果；當(dāng)Ad5HC聯(lián)合化療藥物作用于腫瘤細(xì)胞時(shí)，它能與包括5FU、表柔比星、紫杉醇在內(nèi)的多種化療藥物產(chǎn)生協(xié)同療效；裸鼠移植瘤抗瘤活性試驗(yàn)表明Ad5HC在動(dòng)物體內(nèi)能有效抑制瘤體的生長(zhǎng)本實(shí)驗(yàn)采用一系列體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)，全面驗(yàn)證了由hTERT啟動(dòng)子和Cox2啟動(dòng)子雙重調(diào)控的腫瘤

4、增殖腺病毒Ad5HC良好的腫瘤細(xì)胞特異性和細(xì)胞殺傷作用，從而為腫瘤的病毒基因治療提供了一種新的思路和方法。第二部分：由AFP啟動(dòng)子調(diào)控且攜帶人工合成微小RNA的重組腺病毒的構(gòu)建及抗瘤研究本課題用人工合成的方式合成多段能直接靜默細(xì)胞正常新陳代謝所必需的基因的微小RNA序列，包括磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehydephosphatedehydrogenase，GAPDH)、真核起始因子4E(eukaryotictranslatio