腺病毒載體介導(dǎo)肝細(xì)胞生長因子對局灶性腦缺血的基因治療.pdf

1、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所博士學(xué)位論文腺病毒載體介導(dǎo)肝細(xì)胞生長因子對局灶性腦缺血的基因治療姓名：靳繼德申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：吳祖澤20030601博士論文～一英文摘要T h e r a p e u t i ce f f e c to f a d e n o v i r u s - m e d i a t e d h e p a t o c y t e g r o w t hf a c t o

2、r g e n e t r a n s f e r o n f o c a lc e r e b r a l i s c h e m i a i nr a t sA B S T R A C TB a c k g r o u n d ：C e r e b r a l i s e h e m i a i s o n e o ft h e d i s e a s e s t h r e a t e n i n g h u m a nb e i

3、 n g s ．a(chǎn) n dt h e r ea r en oe f f e c t i v em e t h o d s t ot r e a ti t ．H e p a t o c 礦eg r o w t hf a c t o r ( H G F )p r o f o u n d l ys t i m u l a t e s t h e g r o w t ho fe n d o t h e l i a l c e i l sa n

4、da n g i o g e n e s i s i ni s e h e m i ct i s s u e ，a n da c t sa sas u r v i v a lf a c t o rf o rn e u r o n si nv i t r o ．R e c e n t l y , an o v e lt h e r a p e u t i cs t r a t e g yf o r i s c h e m i cd i s

5、 e a s e s u s i n g a n g i o g e n i c g r o w t h f a c t o r so r t h e i rg e n e s t oe x p e d i t ea n d ／o r a u g m e n t c o l l a t e r a lb l o o d v e s s e ld e v e l o p m e n t h a s b e e n p m p o s e

6、d ．M e t h o d s a n d R e s u l t s ：R e p l i c a t i o n - d e f e c t i v e r e c o m b i n a n t a d e n o v i r a l v e c t o rc a r r y i n gh u m a nH G F 限d - H G F ) w a s g e n e r a t e db yh o m o l o g o u

7、sr e c o m b i n a t i o ni n2 9 3c e l l s ．A f t e ri n f e c t e db yA d - H G F , N I H 3 T 3c e l l se x p r e s s e dH G F ．I tw a s f o u n d t h a tt h et r a n s f e c t i n gr a t eo f a d e n o v i r u sv e c

8、t o rc a r r y i n gg r e e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i n ( G F P ) t ot h ep r i m a r i l yc u l t u r e dn e u r o n so fn e w b o r nr a tw a sh i g hb yf l o wc ”o m e t e r ．H G Fw a se x p r e s s e d i nt

9、 h e p r i m a r y n e r v e c e l l si n f e c t e db y A d - H G E a n d w a s a t r o p h i cf a c t o r t ot h en e u r o n si ns e r n i n ．f r e em e d i u m ．n l c d i s t r i b u t i o na n dp e r s i s t e n c e

10、o f a d e n o v i r a lv e c t o r sw e r e s t u d i e d i n a r a tm o d e l o f f o c a l c e r e b r a li s c h e m i a ．I t w a s d e m o n s t r a t e d t h a tt h e p e a ko f G F P e x p r e s s i o n o c c u r r

11、 e do n d a y3a f t e ra d m i n i s t r a t i o nf r o mf r o z e ns e c t i o ／i s ．G r e e nf l u o r e s c e n c ed e c r e a s e d o n d a y 7a n d d i s a p p e a r e d o n d a y1 4 ．T h e H G F l e v e l so f s e

12、r u m ，h o m o g e n a t e s o f b r a i n a n d o t h e r o 瑪a n s w e r e e x a m i n e d b y E L I S A a n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ．T 1 l er e s u l t ss h o w e d t h e r ew a s n o s i g n i f i c a

13、 n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h e t e s t a n dc o n t r o l g r o u p s ．1 1 1 ev a s c u l a r i t y w ∽e v a l u a t e dt h r o u g ho b s e r v i n gt h ep a r a f f i n ．e m b e d e ds l i d e s s t a i n e

14、dw i t h 臟( h e m a t o x y l i n - e o s i n ) ．A n g i o g e n e s i sw a s o n l yo b s e r v e d i nt h e t e s tg r o u p o n d a y 3 ．I tw a s s h o w e d t h a t t h e c e r e b r a lh a f a r e tv o l u m e w a s

15、s m a l l e ro b v i o u s l y i nt h e t e s tg r o u p a sc o m p a r e dw i t h t h a ti nt h ec o n t r o lg r o u p b yT T Cs t a i n i n g ．E x p r e s s i o no f g e n e si 1 1 t h eb r a i na f t e rf o c a lc e

16、r e b r a li s c h e m i aa n dA d - H G Fi n j e c t i o nw a s i n v e s t i g a t e du s i n g g e n e c h i p s ．I tw a sf o u n d t h a t5 7g e n e si n c r e a s e da n d 5g e n e sd e c r e a s e di nt h ei s c h

17、e m i cg r o u p ，a n d 4 3g e n e sh a c r e a s e da n d 3 2 g e n e s d e c r e a s e di n t h eA d ·H G F 蛔e c t i o n g r o u p ．C o n c l u s i o n ：G e n et h e r a p yo ff o c a lc e r e b r a l i s c h e m

18、i au s i n gH G F g e n ev i at h er e c o m b i n a n t a d e n o v i r u s v e c t o r i s e f f e c t i v e a n d r e l a t i v e l y s a f e w i 血r e 百o n a la d m i n i s t r a t i o n ．K e y w o r d s ：H c p a t o