遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理抑制大鼠缺血心肌肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因表達(dá).pdf

1、目的：缺血預(yù)處理是目前知道的最強(qiáng)的具有確切心肌保護(hù)作用的一種方法，即反復(fù)短暫的缺血發(fā)作可以使心肌在后續(xù)的持續(xù)缺血中得到保護(hù)，從而減少急性心肌梗死(acutemyocardial infarction，AMI)的面積。其后人們發(fā)現(xiàn)小腸或腎臟缺血后可以對(duì)閉塞冠脈較長(zhǎng)時(shí)間的心肌產(chǎn)生保護(hù)作用，能顯著縮小心肌梗死的面積。這種遠(yuǎn)端器官缺血預(yù)處理對(duì)心肌的保護(hù)作用稱為遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理。其機(jī)制的探討對(duì)于預(yù)防和治療心肌梗死具有重要意義。目前研究認(rèn)為，局部組織

2、短暫的缺血再灌注后，可以釋放內(nèi)源性物質(zhì)如腺苷、緩激肽、鈣基因相關(guān)肽、自由基等，這些物質(zhì)激活內(nèi)臟傳入神經(jīng)，通過(guò)神經(jīng)反射的調(diào)節(jié)，最后激活心肌的受體腺苷、緩激肽再激活第二信使蛋白激酶C以及K-ATP通道等來(lái)發(fā)揮心肌的保護(hù)作用。涉及預(yù)處理的內(nèi)源性物質(zhì)很多，但其確切機(jī)制仍不清楚。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor，HGF)是異二聚體雙鏈結(jié)構(gòu)，含有一個(gè)分子量69kd的α鏈和一個(gè)分子量34kd的β鏈，人的王HGF基因定位

3、于第7號(hào)染色體上。HGF與其受體C-met結(jié)合以后發(fā)揮作用，是來(lái)源于間質(zhì)細(xì)胞的一種促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的多功能因子。它具有抗調(diào)亡，促血管新生，修復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞的功能等作用。HGF作為一種心血管保護(hù)因素已試驗(yàn)性應(yīng)用于缺血性心臟病的治療，但它是否參與了心肌缺血預(yù)處理還不清楚。本研究通過(guò)觀察大鼠心肌梗死和遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理后缺血心肌中HGF基因表達(dá)的變化，旨在探討HGF在遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理中的作用，為臨床防治缺血性心臟病提供理論依據(jù)。 方法：

4、 1.復(fù)制大鼠模型及實(shí)驗(yàn)分組：①AMI組：采用大鼠心臟冠狀動(dòng)脈左前降支(left anterior descending coronaryartery，LAD)結(jié)扎法制作急性心肌梗死模型。②下肢缺血預(yù)適應(yīng)組；動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)股動(dòng)脈5min后，再灌注5min，重復(fù)4次后結(jié)扎LAD復(fù)制AMI模型(操作同AMI組)。③腎缺血預(yù)適應(yīng)組：動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈5min后，再灌注5min，重復(fù)3次后結(jié)扎LAD復(fù)制AMI模型(操作同AMI組)。④正常對(duì)照

5、組：取正常大鼠心肌作為對(duì)照。除④組外余各組均在結(jié)扎LAD后1h、2 h、4h、6h、12h處死大鼠取材。 2.實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的觀察：①觀察心電圖：結(jié)扎大鼠LAD后，以心電圖ST段持續(xù)抬高20min作為AMI模型制作成功標(biāo)志。以動(dòng)脈夾夾閉腎動(dòng)脈后雙腎顏色變暗，夾閉股動(dòng)脈后雙下肢顏色青紫分別作為腎缺血預(yù)處理組、下肢缺血預(yù)處理模型復(fù)制成功標(biāo)志。②心肌梗死程度：①②③組均在結(jié)扎LAD后12h處死大鼠，用evans-TTC染色法區(qū)分梗死區(qū)和缺血

6、區(qū)心肌，切取梗死區(qū)心肌及缺血區(qū)心肌并稱重。以梗死心肌與缺血心肌和梗死心肌重量之和的百分比來(lái)表示梗死程度，以缺血區(qū)心肌重量占左心室心肌重量百分比來(lái)表示心肌缺血程度。③缺血區(qū)心肌HGF基因表達(dá)：留取各組各時(shí)間點(diǎn)缺血區(qū)心肌，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)大鼠缺血區(qū)心肌HGF mRNA表達(dá)，用β-actin引物做內(nèi)參照，HGF擴(kuò)增產(chǎn)物與β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物密度掃描之比作為HGF的相對(duì)表達(dá)量。以上所得數(shù)據(jù)均用SPSS13.0進(jìn)行單因

7、素方差分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.模型復(fù)制成功：結(jié)扎大鼠LAD后，心電圖顯示ST段明顯抬高，AMI模型復(fù)制成功。用動(dòng)脈夾夾閉腎動(dòng)脈后可見(jiàn)雙腎顏色蒼白，用動(dòng)脈夾夾閉股動(dòng)脈后可見(jiàn)雙下肢顏色蒼白，提示腎缺血預(yù)處理，下肢缺血預(yù)處理模型復(fù)制成功。 2.梗死程度：心肌組織經(jīng)evans-TTC染色后，正常心肌為藍(lán)色，缺血區(qū)心肌為磚紅色，梗死區(qū)心肌為蒼白色。腎缺血預(yù)處理組，下肢缺血預(yù)處理組較急性心肌梗死組相

8、比其缺血程度無(wú)明顯差異(P>0.05)；而腎缺血預(yù)處理組心肌梗死程度(46.18％±6.15％)、下肢缺血預(yù)處理組梗死程度(46.92％±6.69％)較急性心肌梗死組(66.44％±13.68％)相比均降低大約30％，降低有明顯差異(P<0.05)。腎缺血預(yù)處理組，下肢缺血預(yù)處理組梗死程度相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.缺血區(qū)心肌HGF的基因表達(dá)急性心梗組隨時(shí)間延長(zhǎng)HGF mRNA表達(dá)(1h：0.52±0.12；2h

9、：0.56±0.18；4h：0.61±0.16；6h：0.68±0.11；12h：0.71±0.18、)逐漸上升，較正常對(duì)照組(0.47±0.11)相比4h、6h、12h升高有明顯差異(P<0.05)；腎缺血預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)(2h：0.46±0.15:4h：0.31±0.06；6h：0.35±0.08；12h：0.31±0.06、)及下肢缺血預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)HGF mRNA表達(dá)(2h：0.47±0.07；4h：0.40±0.08；6h：

10、0.47±0.17；12h：0.41±0.11)較急性心梗組各時(shí)間點(diǎn)相比4h、6h、12h均降低，降低有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1.遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理可以顯著降低心肌梗死的面積，保護(hù)心肌少受缺血的損害，遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理的研究有可能為預(yù)防和治療心肌梗死提供一種新的有效的方法。 2.遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理抑制了缺血區(qū)心肌HGF的基因表達(dá)，提示HGF不僅參與了急性心肌缺血的發(fā)病，而且可能是遠(yuǎn)距缺血預(yù)處理減少梗死面積的機(jī)制