腺病毒介導(dǎo)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)豬梗死后心衰改善作用研究.pdf

1、第一部分HGF促進(jìn)豬心肌梗死后血管新生和心功能改善 目的：研究經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染腺病毒(adenovirus，Ad5-)攜帶人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocutegrowthfactor，HGF)對(duì)豬心肌梗死后心衰的改善作用。 方法：12只蘇中幼豬，隨機(jī)分成2組，每組6只，分別為轉(zhuǎn)染Ad5-HGF組(治療組)和轉(zhuǎn)染未攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的腺病毒載體(null-Ad5)組(對(duì)照組)。結(jié)扎前降支形成心肌梗死四周后，經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染Ad5-H

2、GF和null-Ad5時(shí)及轉(zhuǎn)染后三周行冠脈造影和門控心肌灌注顯像，評(píng)價(jià)側(cè)枝循環(huán)形成程度(Rentorp法)，心肌灌注及心功能的變化，以ELISA法檢測(cè)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子蛋白表達(dá)；免疫組化檢測(cè)基因?qū)牒?，有平滑肌?xì)胞包裹的功能血管生成情況。 結(jié)果：(1)經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染Ad5-HGF后心肌高度表達(dá)人HGF蛋白(t=30.685，p＜0.01)。(2)對(duì)照組4周時(shí)左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)為(32.3±2.0)﹪，7周時(shí)為(30.4±2.8)﹪

3、，治療組4周時(shí)為(32.1±1.7)﹪，7周時(shí)為(43.9±4.3)﹪，治療組與對(duì)照組4周時(shí)比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-0.202，p＞0.05)。而治療組7周與4周比較，LVEF值有較明顯增加(t=-7.934，p＜0.01)，治療組與對(duì)照組7周時(shí)比較，LVEF亦有明顯增加(t=6.514，p＜0.01)；治療組心肌灌注顯像較前明顯改善。(3)治療組側(cè)枝循環(huán)形成明顯增多(u=-2.687，p＜0.01)免疫組化顯示治療組出現(xiàn)大量包圍著一

4、層平滑肌肌動(dòng)蛋白-α(smoothmuscleactin，α-SMA)陽(yáng)性平滑肌細(xì)胞的血管，其每平方毫米的數(shù)量明顯高于對(duì)照組(t=17.731，p＜0.01)。 結(jié)論：(1)經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染Ad5-HGF能使心肌高度表達(dá)HGF蛋白。(2)HGF對(duì)心肌梗死慢性期的側(cè)枝循環(huán)形成，心肌灌注及心功能均有改善作用。(3)HGF能促進(jìn)梗死心肌中包被平滑肌細(xì)胞的微小動(dòng)脈生成，可能從而改善了心肌灌注。 第二部分HGF促進(jìn)豬心梗模型干細(xì)胞動(dòng)員的

5、研究 目的：觀察豬心肌梗死后，經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染腺病毒(adenovirus，Ad5-)攜帶人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)引起干細(xì)胞動(dòng)員的作用。 方法：12只蘇中幼豬，隨機(jī)分成轉(zhuǎn)染Ad5-HGF組(治療組)和轉(zhuǎn)染未攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的腺病毒載體(null-Ad5)組(對(duì)照組)，每組6只。結(jié)扎前降支制成心肌梗死模型，手術(shù)后4周行冠脈造影時(shí)給藥，同時(shí)行門控心肌灌注顯像評(píng)價(jià)心肌灌注及心功能情況

6、；給藥3周時(shí)，再次行門控心肌灌注顯像，然后處死動(dòng)物取心臟組織，ELISA法檢測(cè)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子蛋白表達(dá)；免疫組化檢測(cè)基因?qū)牒笤诠Ｋ佬募∫鸬男?yīng)。 結(jié)果：經(jīng)冠脈轉(zhuǎn)染Ad5-HGF后心肌高度表達(dá)人HGF蛋白；治療組心肌組織中CD117+細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)照組，并且同時(shí)表達(dá)c-Met+；治療組心肌血流灌注及左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)較對(duì)照組明顯改善。 結(jié)論：HGF能增加動(dòng)員至缺血區(qū)的CD117+骨髓干細(xì)胞，并且該類細(xì)胞表達(dá)c-M

7、et+；HGF改善心功能及心肌灌注的作用不僅僅是血管新生，可能還涉及到對(duì)干細(xì)胞的動(dòng)員召集作用。 第三部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與HGF對(duì)心肌梗死后心衰治療作用的對(duì)比研究 目的：研究經(jīng)豬非梗死相關(guān)動(dòng)脈分別移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)或腺病毒介導(dǎo)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(adenovirus5-hepatocytegrowthfactor，Ad5-HGF)對(duì)心肌梗死的治療作用。 方法：蘇中幼豬18只，分為三組：BM-MSC

8、s組，Ad5-HGF組與對(duì)照組，三組均經(jīng)開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支制作心肌梗死模型，BM-MSCs組結(jié)扎后2周抽取骨髓分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并在結(jié)扎后4周經(jīng)非梗死相關(guān)動(dòng)脈注入梗死心臟(劑量5×106/ml)，Ad5-HGF組于結(jié)扎后4周經(jīng)非梗死相關(guān)動(dòng)脈注入肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF，4×109pfu)，對(duì)照組則注入同樣量的細(xì)胞培養(yǎng)液(IMDM)；三組均在結(jié)扎后4周和7周行門控心肌顯像評(píng)價(jià)心肌灌注及心功能，并在7周處死，取心臟標(biāo)本，行免疫組化

9、檢查。 結(jié)果：(1)免疫組化結(jié)果顯示：在兩組治療組與對(duì)照組梗死周邊區(qū)均可見(jiàn)新生血管，兩組治療組的新生血管密度高于對(duì)照組(P＜0.01)。(2)門控心肌顯像：治療前兩組治療組及對(duì)照組間LVEF值(左室射血分?jǐn)?shù))均無(wú)明顯差別(P＞0.05)；治療后兩組治療組LVEF值明顯優(yōu)于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；治療組治療前后LVEF值明顯好轉(zhuǎn)(P＜0.01)，對(duì)照組前后LVEF值無(wú)明顯變化(P＞0.05)；兩治療組LVEF值改善幅