磁性納米微粒介導的表達Endostatin的條件復制型腺病毒載體對肝癌的治療作用研究.pdf

1、中山大學博士后研究工作報告磁性納米微粒介導的表達Endostatin的條件復制型腺病毒載體對肝癌的治療作用研究博士后：唐啟彬合作導師：王捷教授專業(yè)：外科學評議委員會主席：冷希圣教授評議委員會成員：區(qū)金銳教授梁力健教授黃洪章教授區(qū)慶嘉教授中山大學附屬第二醫(yī)院2006年12月中國廣州中山大學附屬第二醫(yī)院博士后出站報告摘要測磁性殼聚糖納米顆粒對細胞的毒副作用；RTPCR檢測磁性殼聚糖納米顆粒對內(nèi)皮抑素基因表達的影響；構(gòu)建裸鼠肝癌移植瘤模型，瘤

2、內(nèi)注射磁性納米顆粒耦連的條件復制型腺病毒載體并在腫瘤局部加以磁場誘導，觀察病毒在體內(nèi)的分布。結(jié)果成功構(gòu)建了表達內(nèi)皮抑素的條件復制型腺病毒載體crAd—endo—eGFP及不含治療基因的條件復制型腺病crAdeGFP，并加以大規(guī)模擴增、純化：利用流式細胞術分析crAd—endo—eGFP的轉(zhuǎn)染效率明顯高于質(zhì)粒pShuttle—endo—eGFP的轉(zhuǎn)染效率；RT—PCR、免疫組織化學技術、WesternBlot、ELISA均檢測到了crAd

3、endoeGFP轉(zhuǎn)染細胞后內(nèi)皮抑素的表達，其中轉(zhuǎn)染了erAd—endo—eGFP病毒的HepG2細胞內(nèi)endostain的表達量明顯高于轉(zhuǎn)染了相同拷貝數(shù)復制缺陷型腺病毒載體Ad—endo—e6FP的細胞，而在HUEVC中，兩種病毒無明顯差別；轉(zhuǎn)染細胞后，肝癌細胞株HepG2中，crAdendoeGFP及crAdeGFP的病毒拷貝數(shù)目明顯高于Ad—endoeGFP及AdeGFP，而在人臍帶靜脈血管內(nèi)皮細胞HUEVC中，病毒拷貝數(shù)目并無明顯

4、區(qū)別；復制型的crAdendo—eGFP對Hep62細胞的增殖抑制率明顯高于復制缺陷型的AdendoeGFP，而對于HUEVC細胞兩者并無明顯區(qū)別；流式細胞術檢測crAdendoeGFP可以使HUVBC細胞周期阻滯在Gl期，并誘導細胞的凋亡；細胞劃痕試驗表明crAd—endo—eGFP可以明顯抑制血管內(nèi)皮細胞的遷移能力；在動物體內(nèi)，crAd—endo—eGFP可以抑制腫瘤的生長，并進一步縮小腫瘤體積，并且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，其治療效果

5、明顯好于復制缺陷型的Adendo—eGPP；RT—PCR和免疫組織化學染色均檢測到了endostatin在腫瘤組織中的表達；HE染色crAd—endoeGFP治療組腫瘤組織內(nèi)有明顯的壞死灶，其它臟器組織內(nèi)無明顯改變；PCR檢測病毒DNA，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織內(nèi)和肝臟組織內(nèi)存在腺病毒E2基因，尤以腫瘤組織內(nèi)為高，其它臟器組織均未檢測到E2基因；CD31血管內(nèi)皮細胞免疫組織化學染色證實crAd—endo—eGFP治療組腫瘤組織內(nèi)血管數(shù)目明顯減少：殼