重組復制缺陷型腺病毒載體介導的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應用基因治療缺血皮瓣的實驗研究.pdf

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文重組復制缺陷型腺病毒載體介導的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應用基因治療缺血皮瓣的實驗研究姓名：王偉申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學（整形外科）指導教師：汪春蘭20050501安徽醫(yī)科大學碩士學位論文重組復制缺陷型腺病毒載體介導的VEGFcDNA和bFGFcDNA聯(lián)合應用基因治療缺血皮瓣的實驗研究摘要目的探討局部應用以復制缺陷型腺病毒為載體的血管內皮生長因子(Ad—VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(Ad—

2、bFGF)聯(lián)合應用基因治療對大鼠隨意缺血皮瓣生存的影響，以觀察兩者是否有協(xié)同作用。方法實驗動物選用50只sD大鼠，體重350～400克，普通級，雌雄不論，以標準全價飼料在實驗室分籠喂養(yǎng)，以使其適應實驗室環(huán)境。將大鼠隨機分成五組，每組10只，25％戊巴眈妥鈉腹腔注射麻醉(40mg／kg)。四肢固定后，背部8％硫化鈉脫毛、消毒。于大鼠背部正中設計蒂在尾側的隨意皮瓣，皮瓣的長寬為8cmX2cm，蒂部位于髂嵴水平。于皮瓣遠端真皮下分別注射Ad—

3、VEGF&Ad—bFGF(10只目的基因組)，Ad—VEGF(10只基因對照組)，Ad—bFGF(10只基因對照組)Ad—GFP(10只綠色熒光蛋白基因對照組)，PBS(10只磷酸鹽緩沖液空白對照組)。484時后重新麻醉大鼠，按原設計掀起皮瓣，于深筋膜下鈍性分離至皮瓣蒂部，活動性出血予以嚴格止血，原位用50’絲線間斷縫合，保證皮膚對合良好，術后單籠飼養(yǎng)7天，觀察皮瓣的成活情況，測量皮瓣的成活面積、計算成活率，并采集組織行免疫組化，組織學

4、檢查等。觀察單位面積的微血管計數(shù)、光鏡觀察組織愈合情況。結果5組中Ad—VEGF＆Ad_bFGF組皮瓣成活率最高為(7818181％)，與Ad—VEGF對照組(6467308％)、Ad—bFOF對照組(6557313％)有顯著性差異(尸O01)。Ad—VEGF組與Ad—bFGF組問無顯著差異性，但與AdGFP(5027175％)組及PBS(4962199％)組間有顯著性差異(P001)。免疫組化基因轉染組毛細血管周圍VEGF、bFGF沉