攜帶掌葉半夏凝集素基因的溶瘤腺病毒在肝癌治療中的體內(nèi)外研究.pdf

1、肝癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC）是全球最常見的惡性腫瘤之一，在我國有著很高的發(fā)病率和死亡率，嚴重危害人類的身體健康，目前多以傳統(tǒng)治療手段為主，但已經(jīng)出現(xiàn)了嚴重的瓶頸效應。生物治療具有特異性強，毒副作用小，激發(fā)免疫系統(tǒng)，靶基因矯正的功能，在未來可能成為治療肝癌的主導模式，具有廣闊的應用前景。
　　 掌葉半夏凝集素（PinelliaPedatisectaAgglutinin，PPA）是儲存于掌葉半夏塊莖

2、中的甘露糖結(jié)合植物凝集素。其糖結(jié)合活性可能為分析癌細胞表面糖基化的變化提供工具，并且也是研究腫瘤耐藥性、遷移、惡化及預后等方面的有力工具。當前，植物凝集素已用于標記多種癌癥細胞，并有可能成為腫瘤鑒別診斷、早期診斷的一個新的指標。
　　 在本研究課題中，我們將PPA同本實驗室的癌癥的靶向基因一病毒治療平臺結(jié)合起來，利用攜帶PPA基因的溶瘤腺病毒對多種癌細胞殺傷作用的體外研究，以及抗肝癌Bel-7404細胞裸鼠移植瘤的體內(nèi)研究。體外

3、研究表明，PPA基因表達對多種癌細胞具有殺傷作用。體內(nèi)結(jié)果顯示，PPA基因表達誘導巨噬細胞進入裸鼠移植瘤，并吞噬肝癌細胞。
　　 方法
　　 (1)利用Adeasy系統(tǒng)成功包裝出重組溶瘤腺病毒ZD55-PPA。(2)MTT法檢測ZD55-PPA對多種惡性腫瘤細胞株的增殖抑制作用。(3)細胞形態(tài)學觀察病毒的殺傷力和安全性。(4)結(jié)晶紫實驗檢測細胞病變效應。(5)RT-PCR從mRNA上檢測PPA外源基因的表達水平。(6)A

4、nnexinV/PI流式細胞術(shù)檢測ZD55-PPA誘導Bel-7404的凋亡情況。(7)運用裸鼠成瘤實驗、HE染色、透射電鏡實驗研究PPA體內(nèi)抗瘤機制。
　　 結(jié)果
　　 (1)成功使用Adeasy系統(tǒng)構(gòu)建了攜帶PPA基因的溶瘤腺病毒。(2)細胞實驗:MTT、形態(tài)學觀察、結(jié)晶紫實驗均證實PPA基因具有顯著的抑制細胞增殖作用，RT-PCR實驗說明PPA基因在mRNA水平上高表達，流式細胞術(shù)實驗提示凋亡可能并不是PPA誘導細