盤鮑魚唾液酸凝集素降低溶瘤痘苗病毒在膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型中引發(fā)的毒性的研究.pdf

1、近年來，癌癥的發(fā)病率越來越高，尋找癌癥的誘因和有效的治療方法來延長患者的生存周期以及治愈癌癥患者已經(jīng)成為當(dāng)今的研究重點(diǎn)。目前，除了傳統(tǒng)的手術(shù)治療、放療和化療外，免疫治療和基因治療被視為最有希望攻克癌癥的方法，其中CAR-T是目前免疫治療研究中的主流，靶向基因-病毒療法則是目前基因治療研究中的重點(diǎn)，幾種方法聯(lián)合治療也正在被開發(fā)研究中，這要求對每一種方法的作用和副作用要更清楚的認(rèn)知和理解。
　　本課題組最近幾年一直在從事以溶瘤痘苗病毒

2、和腺病毒為載體篩選和研究凝集素基因在腫瘤細(xì)胞中的作用。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)數(shù)種促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡效果較好的凝集素基因，但在膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究中，發(fā)現(xiàn)一種盤鮑魚唾液酸凝集素(Haliotis discus discus sialic acid binding，HddSBL)有較為獨(dú)特的作用，因此對其作用機(jī)制進(jìn)行了進(jìn)一步的探究。
　　本課題首先構(gòu)建了重組溶瘤痘苗病毒oncoVV-HddSBL，以PBS和空載溶瘤痘苗病毒oncoVV為對照，在C6細(xì)胞裸

3、鼠皮下移植模型腹腔注射治療中探究HddSBL在體內(nèi)的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)oncoVV引起了小鼠死亡，HddSBL能夠延長小鼠的存活時(shí)間，平均多活9天半;采用半定量PCR檢測C6細(xì)胞經(jīng)過病毒處理后相關(guān)炎癥因子的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)oncoVV能夠引起C6細(xì)胞高表達(dá)IL-1β、IL-6和TNF-α等炎癥因子，結(jié)合小鼠死之前消瘦的現(xiàn)象認(rèn)為oncoVV引起了小鼠腫瘤惡病質(zhì)，導(dǎo)致其死亡，而HddSBL能夠降低IL-6和TNF-α的表達(dá)，緩解了惡病質(zhì)的發(fā)生;用

4、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測NF-κB和AP-1炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，發(fā)現(xiàn)HddSBL激活而不是抑制NF-κB和AP-1的活性，說明這不是降低相關(guān)炎癥因子的表達(dá)的主要原因;通過ELISA檢測小鼠血清中大鼠IL-2的水平，發(fā)現(xiàn)oncoVV引起C6高表達(dá)IL-2，而HddSBL能夠降低IL-2的表達(dá)，這可能是HddSBL降低相關(guān)炎癥因子的表達(dá)的作用方式;為了進(jìn)一步探究HddSBL在C6細(xì)胞中的作用，進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序和分析，其中HddSBL改變多種組蛋

5、白成分和降低多種抗病毒基因引起了濃厚的興趣;通過western blot檢測相關(guān)蛋白，發(fā)現(xiàn)HddSBL明顯降低Histone H3，Histone H4的蛋白水平，而Histone H3第8位精氨酸非對稱雙甲基化和Histone H4第3位精氨酸非對稱雙甲基化明顯升高，說明HddSBL確實(shí)改變了組蛋白的狀態(tài)，繼而影響染色質(zhì)的核小體組裝，參與了染色質(zhì)水平的調(diào)控，這結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果一致;用半定量PCR對相關(guān)抗病毒基因進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)

6、，oncoVV能夠引起MX2、DDX58、IFIT3和IFIT2抗病毒基因高表達(dá)，而HddSBL能夠降低MX2、DDX58、IFIT3和IFIT2的表達(dá)，與轉(zhuǎn)錄組測序的結(jié)果一致;檢測oncoVV和oncoVV-HddSBL在C6細(xì)胞中的復(fù)制情況，發(fā)現(xiàn)HddSBL能夠顯著促進(jìn)溶瘤痘苗病毒在C6細(xì)胞中的復(fù)制，這應(yīng)該跟其能夠降低抗病毒蛋白表達(dá)相關(guān)。本研究運(yùn)用溶瘤痘苗病毒為載體，為盤鮑魚唾液酸凝集素降低溶瘤痘苗病毒在膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型中引發(fā)的毒性提