188Re標(biāo)記U87-EGFRvⅢ細(xì)胞的適配子在膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型中的作用.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文188Re標(biāo)記U87。EGFRvlII細(xì)I胞的適配子在膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型中的作用Theeffectsof188RelabelledaptamersofU87EGFRvlllcellsingliomaanimalmodel課題來源：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30973481，81272509)學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院伍錫棟張興梅副教授神經(jīng)生物學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2013年4月18

2、目廣州中文摘要EGFRVIII在正常細(xì)胞中不表達(dá)，僅存在于惡性的腫瘤細(xì)胞，在正常組織中不表達(dá)，因而是一個(gè)很好的腫瘤治療靶標(biāo)，用CellSELEX技術(shù)篩選針對(duì)過表達(dá)U87EGFRvIII細(xì)胞的適配子對(duì)膠質(zhì)瘤靶向治療研究有重要意義，而且使用的Cell—SELEX技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。適配子具有分子小、快速的血漿清除率、高組織穿透力、免疫原性低、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，文獻(xiàn)報(bào)道適配子可有效地應(yīng)用于靶向治療、檢測(cè)和診斷等。2005年第一個(gè)適配

3、子的藥物“Mucagen”已經(jīng)被美國FDA批準(zhǔn)上市，另外針對(duì)核仁蛋白的ASl411等適配予也在臨床試驗(yàn)中，這些都表明適配子在疾病治療中作用。隨著SELEX技術(shù)的進(jìn)展，它已經(jīng)成為了生命科學(xué)研究和醫(yī)藥研究中越來越重要的研究工具，兇此應(yīng)用CellSELEX技術(shù)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的靶標(biāo)篩選和研究劉膠質(zhì)瘤的臨床診斷、治療及腫瘤基礎(chǔ)研究具有很大的應(yīng)用價(jià)值和前景，通過篩選得到的特異性適配子也將成為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究中有效的分子識(shí)別工具。本實(shí)驗(yàn)研究主要從三方

4、面研究：一是在細(xì)胞水平上篩選針對(duì)U87一EGFRvIII細(xì)胞的適配子及其結(jié)合特異性鑒定；二是在裸鼠動(dòng)物荷瘤模型上初步觀察篩選得到的適配子U2對(duì)腫瘤生長的抑制作用；三是188Re標(biāo)記適配子在體內(nèi)的代謝情況和靶向性治療研究。(1)通過應(yīng)用Cell—SELEX技術(shù)針對(duì)靶細(xì)胞U87EGFRvHI篩選適配子。在第4輪開始引入反篩細(xì)胞U87MG，應(yīng)用消減SELEX技術(shù)篩選適配子。在篩選適配子過程中嚴(yán)格地按照一定的比例投入文庫的量，在每一次投入的次文

5、庫都要經(jīng)過尿素膠鑒定。在洗滌細(xì)胞時(shí)隨著篩選輪數(shù)的不斷增加，洗滌時(shí)問和洗滌次數(shù)也逐漸的增加，文庫與細(xì)胞的孵育時(shí)間也逐漸的減少。我們利用PCR技術(shù)擴(kuò)增雙鏈dsDNA，通過鏈霉親和素磁珠分離法分離單鏈ssDNA，得到帶FITC的單鏈ssDNA作為下次篩選的文庫。PCR過程中需要對(duì)反應(yīng)體系和各種試劑的反應(yīng)量進(jìn)行梯度摸索，最后確定為條帶單一、純度高、分子量為76bp的為目的條帶，結(jié)果表明PCR擴(kuò)增得到的雙鏈dsDNA和磁珠分離法得到的單鏈ssDN