FAP-α在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及siRNA下調(diào)期表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87增殖的影響.pdf

1、目的:探討成纖維細(xì)胞激活蛋白α(Fibroblast activation proteinα，F(xiàn)AP-α)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)，分析其與臨床病理學(xué)特征和預(yù)后的關(guān)系;研究小片段干擾RNA(siRNA)靶向下調(diào)FAP-α表達(dá)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87增殖的影響。
　　方法:
　　(1)應(yīng)用免疫組化染色檢測(cè)33例膠質(zhì)瘤和7例正常腦組織中FAP-α蛋白的表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色和western blot法檢測(cè)U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞

2、株中的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析。同時(shí)對(duì)所有病例進(jìn)行隨訪，分析FAP-α表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。
　　(2)通過(guò)脂質(zhì)體將小片段干擾RNA轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87（免疫細(xì)胞化學(xué)染色和western blot法顯示U87細(xì)胞FAP-α的表達(dá)水平高于U251），使用westernblot法檢測(cè)FAP-α的蛋白表達(dá)變化，同時(shí)檢測(cè)Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)變化，使用Real-time PCR法檢測(cè)FAP-α和增殖核抗原(PCNA

3、)的mRNA水平，CCK8法評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染后U87細(xì)胞的增殖能力。
　　結(jié)果:
　　(1)低級(jí)別膠質(zhì)瘤和高級(jí)別膠質(zhì)瘤之間FAP-α蛋白的IOD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);FAP-α的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病理級(jí)別正相關(guān)(r=0.673，P＜0.01);7例正常腦組織FAP-α蛋白不表達(dá)或表達(dá)弱陽(yáng)性，與低級(jí)別膠質(zhì)瘤（P＜0.05）和高級(jí)別膠質(zhì)瘤（P＜0.01)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在U251和U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞上存在不同程度的表達(dá)，其中U

4、87的表達(dá)水平較高;FAP-α的表達(dá)強(qiáng)度與病人性別、腫瘤大小、年齡以及手術(shù)切除程度并無(wú)明顯聯(lián)系（P均＞0.05），生存分析顯示低FAP-α組和高FAP-α組兩者生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），F(xiàn)AP-α的表達(dá)是影響膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P=0.038）。同時(shí)檢索REMBRANDT數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)FAPmRNA低表達(dá)組預(yù)后明顯好于高表達(dá)組（P＜0.01）。
　　(2)①轉(zhuǎn)染48h后，siRNA組FAP-α mRNA和蛋白的表

5、達(dá)明顯低于NC組和Blank組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01); siRNA組較NC組caspase-3蛋白表達(dá)增加（P＜0.05);Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.01)，siRNA組較NC組PCNA mRNA表達(dá)水平明顯下降（P＜0.01)。②轉(zhuǎn)染后48h、72h、96h siRNA組U87細(xì)胞吸光度值低于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論:FAP-α在腦膠質(zhì)瘤和膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251和U87中存在表達(dá)，