半夏與掌葉半夏凝集素組成比較及特性研究.pdf

1、半夏和掌葉半夏均為單子葉植物，同屬于天南星科、半夏屬。它們?yōu)閭鹘y(tǒng)中藥材。主要活性成分除活性多糖、生物堿外，還有蛋白質(zhì)。其中，凝集素是它們總蛋白的重要組分之一?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的半夏和掌葉半夏的凝集素屬于單子葉植物中甘露糖凝集素家族。本項(xiàng)研究就是針對(duì)半夏及掌葉半夏中的凝集素成分來(lái)展開(kāi)的，包括總蛋白和凝集素的提取和抗蟲(chóng)、抗植物病毒活性研究以及半夏和掌葉半夏的凝集素性質(zhì)、組成成分的差異比較等重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。 硫酸銨鹽析比丙酮沉淀能更好地分離總蛋

2、白。用硫酸銨分離方法得到了總蛋白后，再將總蛋白過(guò)豬甲狀腺球蛋白甘露糖親和層析柱。親和層析中，先用純水洗脫，后用8 M脲洗脫。分別收集純水和8M尿素的洗脫峰組分，冰凍干燥，獲得凝集素樣品。 為弄清兩種半夏的凝集素組成成分及其特征，進(jìn)行了SDS-PAGE、雙向電泳、等電點(diǎn)測(cè)定和質(zhì)譜分析。SDS-PAGE表明，它們的總蛋白主要含有分子量約為12kD、24kD及46kD的成分，推測(cè)為凝集素的單體及其二聚體和四聚體。經(jīng)雙向電泳、等電點(diǎn)分析

3、，結(jié)果顯示半夏僅有一種凝集素，分子量約為12kD、pI約為5.9，但掌葉半夏含有兩種凝集素組分，這兩種組分分子量近乎一致，均約為12kD，但pI值不同，分別為pI 5.9和pI 6.1。質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，兩種半夏均有一種分子量為12,065 Da的凝集素，掌葉半夏中獨(dú)有一種分子量為11，905Da的凝集素，這一結(jié)果與雙向電泳一致。以上結(jié)果一致表明，兩種半夏的凝集素成分的組成存在顯著差異，它們的主要組分，除均有單體分子量為12,065 Da、

4、pI 5.9的成分外，半夏中還有12,659 Da的成分，掌葉半夏中還有11，095：Da、pI 6.1的成分，推測(cè)該11，905Da成分是一種新的凝集素。 對(duì)兔血紅細(xì)胞的凝集實(shí)驗(yàn)表明，半夏和掌葉半夏的凝集素的平均最低凝集濃度為 0.4μg·ml<'-1>，總蛋白的平均最低凝集濃度為1.56 μg·ml<'-1>，表明分離到的凝集素具有較高的生物活性。單糖特異性結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，62.5mM的甘露糖能有效抑制16倍凝集滴度的凝集素對(duì)

5、兔血紅細(xì)胞的凝集，而半乳糖和葡萄糖的濃度在250mM時(shí)仍無(wú)抑制效果，該結(jié)果表明所分離的凝集素能與甘露糖專一結(jié)合。 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，半夏和掌葉半夏的凝集素對(duì)熱和酸堿均具有相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性。它們?cè)?0℃水浴90min后，仍能保持活性不變，但隨著處理溫度的升高和時(shí)間的增長(zhǎng)，活性會(huì)逐漸喪失。酸堿處理表明，pH6.0—10.0，它們的活性完全穩(wěn)定，pH4.0-5.0，其活性完全喪失，pH2.0-4.0或pH10.8-12.0，其活性部分喪失。

6、對(duì)番茄花葉病毒侵染力的抑制實(shí)驗(yàn)表明，半夏和掌葉半夏的凝集素在0.2 mg.ml<'-1>時(shí)、總蛋白在1mg·m<'-1>。時(shí)能有效抑制一定濃度的病毒汁液對(duì)心葉煙的侵染，抑制率分別達(dá)50﹪和70﹪左右，但不能有效抑制高濃度病毒汁液的侵染力，表明它對(duì)病毒有一定的抑制作用。 對(duì)褐飛虱的致死作用實(shí)驗(yàn)表明，在1mg-m<'-1>。濃度下，總蛋白均對(duì)褐飛虱若蟲(chóng)有顯著致死效應(yīng)，處理兩天的校正死亡率即達(dá)62﹪以上，處理四天時(shí)，校正死亡率均在96