掌葉半夏提取物抗衰老活性及作用機(jī)制研究.pdf

1、掌葉半夏又稱虎掌南星，為天南星科植物掌葉半夏（Pinellia pedatisecta Schott）的塊莖，有燥濕化痰、祛風(fēng)止痙，散結(jié)消腫等功效。老年人多痰濁體質(zhì)，且與衰老有關(guān)的疾病如高血脂、糖尿病等都有痰濁的表現(xiàn)，因而化痰祛邪為治療老年病、延緩衰老的主要方法。掌葉半夏為燥濕化痰藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，掌葉半夏具有鎮(zhèn)咳祛痰、鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥、抗腫瘤和抗氧化等作用。課題組成員通過細(xì)胞實(shí)驗篩選發(fā)現(xiàn)：掌葉半夏提取物具有抗衰老活性，其中95％

2、乙醇提取物抗衰老活性最好。因此本文主要針對95%乙醇提取部位，深入研究其抗衰老活性及作用機(jī)制。
　　目的：研究掌葉半夏95%乙醇提取物對 D-半乳糖致亞急性衰老大鼠的影響，探討掌葉半夏提取物的體內(nèi)抗衰老活性，并探討其可能的分子作用機(jī)制。
　　方法：采用高效液相色譜法對掌葉半夏95%乙醇提取物進(jìn)行化學(xué)成分分析；SPF級雄性 Wistar大鼠60只，隨機(jī)分成六組：正常組、模型組、掌葉半夏低劑量組、掌葉半夏中劑量組、掌葉半夏高劑量

3、組、熱量限制組。模型組，掌葉半夏低、中、高組，熱量限制組采用 D-半乳糖誘導(dǎo)建立衰老模型，造模同時掌葉半夏低、中、高組給予掌葉半夏95%乙醇提取物進(jìn)行灌胃。熱量限制組進(jìn)食量為正常組的60%，作為陽性對照，給藥同時監(jiān)測大鼠生長狀態(tài)。連續(xù)給藥6周后處死動物，采用Morris水迷宮試驗，測試實(shí)驗大鼠行為學(xué)改變；檢測肝臟和腦組織中抗氧化相關(guān)指標(biāo)：SOD，MDA和 T-AOC等；采用酶聯(lián)免疫標(biāo)記法對實(shí)驗大鼠端粒酶活性進(jìn)行測定；采用免疫組化方法對

4、SIRT1轉(zhuǎn)錄水平重要調(diào)節(jié)因子 p53和 FOXO3a進(jìn)行檢測；采用 RT-PCR法檢測大鼠長壽基因 SIRT1、FOXO3a和p53mRNA的表達(dá)情況；采用Western blot方法對p53、FOXO3a、HuR（ELAVL1）、RPS19BP1、DBC1等蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：（1）通過 HPLC色譜分析數(shù)據(jù)可確定掌葉半夏95%乙醇提取物中所含有的化學(xué)成分有：鳥苷、腺苷、尿苷和琥珀酸。
　?。?）一般狀態(tài)觀察結(jié)

5、果：正常對照組大鼠飲食正常，行動敏捷，毛色光亮，皮膚有彈性，精神狀態(tài)良好；模型組相對于正常組，表現(xiàn)為萎靡不振，反應(yīng)和行動遲鈍，皮膚松弛，毛色灰暗，毛發(fā)稀疏脫落，經(jīng)常扎堆；熱量限制組大鼠與模型組比較，體重明顯減輕，行動敏捷，毛色有光澤，精神較為亢奮。掌葉半夏高中低劑量組大鼠在行動、皮膚及毛發(fā)狀態(tài)方面均較模型組好，精神狀態(tài)良好。
　?。?）體重變化率：各組間大鼠體重?zé)o顯著性差別（P＞0.05），組別與時間點(diǎn)間無交互作用，大鼠體重變化率

6、呈逐漸上升趨勢，而熱量限制組大鼠較其他組體重增長較緩慢。
　?。?）行為學(xué)實(shí)驗：與模型組相比，掌葉半夏低、中、高劑量組及熱量限制組大鼠逃避潛伏期縮短，游泳速度加快，穿越目標(biāo)象限的次數(shù)增加。其中以掌葉半夏高劑量和熱量限制的作用效果最顯著。
　　（5）肝臟和腦組織脂質(zhì)過氧化物含量：與正常組比較，模型組大鼠肝腦組織中 SOD和 T-AOC的活性下降，而 MDA含量增加，但分別給予掌葉半夏提取物灌胃和熱量限制干預(yù)后，衰老大鼠肝、腦組

7、織中的 SOD和T-AOC水平均有不同程度的升高，同時MDA含量也有一定程度的降低。
　?。?）腦組織端粒酶活性：與模型相比，正常組腦組織中，端粒酶活性明顯增加（P<0.01），熱量限制組和掌葉半夏高中低劑量組端粒酶活性（P<0.01）較模型組亦明顯增加。其中高劑量組的 TE活性增加最顯著。
　?。?）免疫組織化學(xué)法檢測 p53和 FOXO3a表達(dá)：與模型組比較，肝組織和腦組織中掌葉半夏給藥組中的 FOXO3a陽性表達(dá)率高于

8、模型組（P<0.05），而 p53表達(dá)率低于模型組（P<0.05）。熱量限制組中的FOXO3a和p53陽性表達(dá)率也分別高于和低于模型組。
　　（8）實(shí)時熒光定量PCR檢測SIRT1、FOXO3a和p53 mRNA表達(dá)：結(jié)果顯示，在大鼠肝、腦組織中，掌葉半夏給藥組和熱量限制組中 SIRT1和FOXO3amRNA的表達(dá)量均高于模型組，但p53mRNA的表達(dá)量要低于模型組。
　?。?）Western Blot檢測FOXO3a、p5

9、3、HuR、RPS19BP1、DBC1蛋白表達(dá)：與模型組比較，掌葉半夏給藥組高中低劑量組的 FOXO3a、HuR和RPS19BP1表達(dá)量明顯增加，DBC1和p53表達(dá)量明顯減少。其中高劑量組的各蛋白表達(dá)變化最顯著。
　　結(jié)論：掌葉半夏提取物在體內(nèi)具有較好的抗衰老活性。對比掌葉半夏高中低劑量組的各指標(biāo)數(shù)據(jù)可知，掌葉半夏高劑量組的抗衰老活性最好，且其作用效果與熱量限制相當(dāng)。掌葉半夏提取物對大鼠的體重變化無不良影響；且可以很好的改善大鼠

10、學(xué)習(xí)記憶的能力，可以減緩因衰老引起的行為學(xué)變化；也能顯著增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，減少過氧化產(chǎn)物丙二醛含量，減緩氧化應(yīng)激損傷的過程；也可以在一定程度上提高衰老大鼠端粒酶的活性，有穩(wěn)定端粒的長度和結(jié)構(gòu)的作用；其抗衰老活性的物質(zhì)基礎(chǔ)可能與其中含有的鳥苷、腺苷、尿苷和琥珀酸等化學(xué)成分有關(guān)。掌葉半夏抗衰老的機(jī)制可能與掌葉半夏提取物能促進(jìn)長壽基因 SIRT1的表達(dá)，同時對 p53和 FOXO3a基因表達(dá)以及相關(guān)蛋白 FOXO3a、p53、HuR、DBC