掌葉蝎子草藥理活性及作用機(jī)制研究.pdf

1、掌葉蝎子草(Girardiniadiversifolia(Link)Friis)，為蕁麻科(Urtica)蝎子草屬(Girardinia)，多年生草本植物，又名:大蝎子草，紅活麻，主要分布于我國(guó)的甘肅、陜西、湖北、湖南、河南、貴州、四川、重慶和云南等地區(qū)。掌葉蝎子草在我國(guó)民間為常用植物藥，在漢族、苗族、維吾爾族、彝族等多個(gè)民族中廣泛使用，藥用歷史悠久，許多文獻(xiàn)有關(guān)于掌葉蝎子草民間應(yīng)用的記載。近年來，研究發(fā)現(xiàn)與蝎子草屬植物同屬蕁麻科的蕁麻

2、屬植物具有降血糖、抗氧化活性、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)痛、降血壓的作用。研究發(fā)現(xiàn)蝎子草屬的蝎子草(G.suborbiculataC.J.Chen)具有抗炎、鎮(zhèn)痛活性，并從該種植物中分離到抗菌化合物;目前，對(duì)掌葉蝎子草的抗炎、鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行了研究，但目前未見關(guān)于掌葉蝎子草毒性、降血糖、治療銀屑病、抗菌機(jī)制等的研究報(bào)道。
　　 基于以上調(diào)研，我們對(duì)掌葉蝎子草毒性、抗炎、抑菌及其活性成分的作用等進(jìn)行研究，主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 (1

3、)掌葉蝎子草毒性研究
　　 掌葉蝎子草醇提浸膏對(duì)小鼠的LD50值為10.52g/kg，LD50的95％可信限為8.55-12.93g/kg;掌葉蝎子草水提浸膏對(duì)小鼠的MTD為40g/kg，掌葉蝎子草醇提浸膏毒性較大，而水提浸膏屬于無(wú)毒。
　　 小鼠經(jīng)口慢性毒性研究表明:給藥90d后，掌葉蝎子草醇提浸膏對(duì)小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟和睪丸有一定毒性，且毒性隨掌葉蝎子草醇提浸膏劑量增加增大，其引起小鼠臟器組織的病理變化也越

4、明顯;而空白對(duì)照組小鼠各臟器組織顯示的顯微結(jié)構(gòu)均正常，未出現(xiàn)明顯病理變化。掌葉蝎子草醇提浸膏對(duì)小鼠體重影響較小，對(duì)各臟器系數(shù)無(wú)明顯影響;對(duì)小鼠血液學(xué)部分指標(biāo)有影響，但對(duì)血液生化指標(biāo)有較大影響，可能對(duì)肝臟代謝有一定的影響。
　　 (2)掌葉蝎子草多糖降血糖活性及作用機(jī)制研究
　　 掌葉蝎子草多糖提取、去雜、純化的主要方法:選取液料比20:1，80℃左右熱水浸提3次，每次1h，合并提取液，濃縮至m/v(m原料∶v濃縮液)的比

5、值為1:1，加入95％的無(wú)水乙醇至醇濃度約為80％進(jìn)行4℃過夜醇沉，沉淀依次用石油醚、丙酮、無(wú)水乙醇洗滌至洗脫液無(wú)色后，真空干燥得掌葉蝎子草粗多糖。將掌葉蝎子草粗多糖復(fù)溶于水，優(yōu)選10％三氯乙酸脫蛋白，1.5％活性炭脫色除雜，經(jīng)脫蛋白脫色處理后的多糖溶液經(jīng)過透析48h除去小分子雜質(zhì)，然后冷凍干燥即得掌葉蝎子草精制多糖。
　　 測(cè)定掌葉蝎子草粗多糖的還原力、清除·OH和O2-·的活性等三個(gè)方面研究其抗氧化能力。結(jié)果顯示，掌葉蝎子草

6、粗多糖具有一定的還原能力，且隨濃度的增大還原能力也逐漸增強(qiáng)，但相同起始濃度下其還原能力不及維生素C(Vc)。掌葉蝎子草粗多糖對(duì)·OH和O2-·也有一定的清除能力，對(duì)·OH的清除效果強(qiáng)于對(duì)O2-·的清除效果，其清除·OH的IC50值大于2mg/mL，清除O2-·的IC50值大于5mg/mL，但掌葉蝎子草粗多糖清除自由基的能力均不及Vc，因Vc的IC50值均小于1mg/mL。
　　 用四氧嘧啶致高血糖小鼠模型，造模成功的高血糖小鼠完

7、全符合糖尿病“三高一低”癥狀，攝食量、飲水量明顯升高，血糖值明顯升高，血清SOD水平明顯下降，血清MDA含量明顯升高，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)也明顯下降。給予低、高劑量掌葉蝎子草多糖治療2W后，掌葉蝎子草多糖高劑量組（400mg/kg）小鼠血糖值明顯下降，血清SOD水平也明顯上升，還一定程度降低了血清MDA水平，提高了小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，但治療效果仍不及陽(yáng)性對(duì)照藥物鹽酸二甲雙胍片顯著。掌葉蝎子草多糖低劑量組(200mg/kg)也能在一定程

8、度上降低糖尿病小鼠的血糖值和血清MDA水平，提高血清SOD水平、胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，但效果都不明顯。
　　 (3)掌葉蝎子草對(duì)銀屑病的作用研究
　　 掌葉蝎子草水提浸膏和醇提浸膏能促進(jìn)小鼠尾部上皮細(xì)胞顆粒層的形成，從小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響研究結(jié)果也進(jìn)一步證實(shí)掌葉蝎子草水提浸膏和醇提浸膏能部分抑制上皮細(xì)胞的有絲分裂，而陽(yáng)性藥物甲氨喋吟能明顯促進(jìn)小鼠尾部上皮細(xì)胞顆粒層的形成和抑制小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂，說明掌葉蝎子

9、草水提浸膏和醇提浸膏均對(duì)銀屑病有一定的治療作用，但治療效果明顯弱于藥性藥物甲氨喋吟。
　　 (4)掌葉蝎子草對(duì)感染化膿傷口治療效果研究
　　 將金黃色葡萄球菌用涂擦的方法感染到小鼠傷口上，能使小鼠傷口感染化膿，用制備的掌葉蝎子草軟膏涂沫小鼠感染金黃色葡萄球菌的傷口，明顯抑制傷口的化膿，涂抹治療5天時(shí)，傷口已經(jīng)完全結(jié)痂、愈合，表明掌葉蝎子草醇提浸膏軟膏對(duì)已感染化膿的傷口有明顯的治療效果。
　　 (5)掌葉蝎子草抑菌

10、化合物的分離純化
　　 經(jīng)過系統(tǒng)的化學(xué)鑒別分析，判斷掌葉蝎子草中主要化學(xué)成分為糖、多糖、苷類、酚性成分、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、黃酮類、生物堿類、甾體或三萜類，不含揮發(fā)油、油脂、強(qiáng)心苷等。
　　 以對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用為依據(jù)，通過醇提、不同溶劑萃取、柱層析、高效液相色譜分離等方法分離純化抗菌活性物質(zhì)，通過波譜學(xué)方法(1H-NMR、13C-NMR、MS)對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。得到4個(gè)對(duì)金黃色葡萄球具有抑制作用的單體化合物，分別

11、是:鄰苯二甲酸二異丁酯，6-羥基-7-甲氧基香豆素、香草酸（3-甲氧基-4-羥基苯甲酸）和(2Z，3Z)-4-氨基丙烯酸-5-呋喃核糖苷。其中，化合物(2Z，3Z)-4-氨基丙烯酸-5-呋喃核糖苷目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 (6)掌葉蝎子草中香草酸藥理活性及作用機(jī)制研究
　　 與空白對(duì)照組比較，香草酸對(duì)小鼠耳腫脹作用無(wú)抑制作用，只有高劑量香草酸能降低小鼠足腫脹度和抑制MDA的釋放，香草酸其余各劑量即不能明顯降低小鼠耳脹

12、度和足腫脹度，也不能升高小鼠血清SOD活性和抑制血清MDA的釋放，降低炎足中NO含量;而陽(yáng)性對(duì)照藥物阿司匹林對(duì)小鼠的耳腫脹度和足腫脹度有顯著抑制作用，明顯升高血清SOD含量，降低血清MDA水平和炎足中NO含量。因此，結(jié)果表明香草酸對(duì)致炎引起的小鼠炎癥無(wú)明顯的抗炎活性。
　　 測(cè)定香草酸抗菌譜，結(jié)果表明:香草酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌、綠膿桿菌和短桿菌等均具有抑制作用，其最低抑菌濃度為6mg/mL。

13、>　　 香草酸對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線的影響結(jié)果表明:香草酸能夠抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)分裂，但不能殺滅金黃色葡萄球菌。
　　 香草酸對(duì)金黃色葡萄球菌質(zhì)粒DNA和基因組DNA結(jié)合結(jié)果表明，香草酸與金黃色葡萄球菌的質(zhì)粒DNA沒有結(jié)合;香草酸可能與金黃色葡萄球菌的基因組DNA有結(jié)合，影響細(xì)菌DNA的復(fù)制，從而抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)繁殖。
　　 香草酸能抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成，并能部分破壞已形成的生物被膜，影響金