基于膜分離組分生物活性的大蝎子草質(zhì)量研究.pdf

1、大蝎子草[Girardiniadiversifolia(Link) Friis]為貴州民間地方習(xí)用藥材，主要用于治療中風(fēng)不語(yǔ)、咳嗽多痰、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷、骨折等。本研究利用膜技術(shù)對(duì)大蝎子草水提液進(jìn)行膜截留，并對(duì)膜截留組分進(jìn)行相關(guān)整體動(dòng)物及細(xì)胞生物活性實(shí)驗(yàn)，尋找活性膜分離組分以及闡明作用機(jī)制。同時(shí)根據(jù)活性膜段的研究，進(jìn)一步分析大蝎子草藥材化學(xué)組份及質(zhì)量研究，建立基于可能生物活性的大蝎子草藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本論文主要分為兩個(gè)部分：

2、　　1.大蝎子草膜分離組分生物活性研究
　　1.1目的：
　　通過(guò)對(duì)大蝎子草膜分離組分的抗炎、鎮(zhèn)痛作用研究，尋找活性膜段，并對(duì)其抗炎作用機(jī)制進(jìn)行探索性研究。
　　1.2方法：
　　1.2.1大蝎子草膜截留組分的制備
　　采用膜分離技術(shù)對(duì)大蝎子草水提液，按照分子量的不同進(jìn)行膜截留，并對(duì)各截留段進(jìn)行冷凍干燥。分別得到UF100、UF50、UF10、UF5、NF800、NF400、NF200及NF200以下8個(gè)組

3、分。
　　1.2.2大蝎子草膜截留組分生物活性實(shí)驗(yàn)
　　采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透模型評(píng)價(jià)不同膜分離組分的抗炎作用，采用小鼠熱刺激致痛和醋酸扭體模型評(píng)價(jià)鎮(zhèn)痛作用，尋找活性膜截留組分。
　　采用LPS刺激小鼠巨噬細(xì)胞，引起細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，通過(guò)蝎子草膜分離物干預(yù)作用深入研究炎癥發(fā)生過(guò)程中的炎癥介質(zhì) NO、NOS以及 TNF-α的變化，闡述其抗炎作用機(jī)制。
　　1.3結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯

4、示，大蝎子草UF100及NF400組在小劑量時(shí)即能明顯抑制二甲苯所致炎癥反應(yīng)及醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加；也對(duì)熱及化學(xué)刺激致痛有顯著抑制作用。這兩組膜分離物也可以顯著抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì)NO、NOS及TNF-α。
　　1.4結(jié)論：
　　大蝎子草UF100及NF400組有較強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其抗炎作用可能與減少巨噬細(xì)胞釋放NO、NOS、TNF-α等炎癥介質(zhì)有關(guān)。本研究為大蝎子草的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)和方向。

5、　　2.基于活性膜截留組分的大蝎子草藥材化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　2.1目的：
　　基于活性膜截留組分的研究，分析大蝎子草藥材的化學(xué)成分及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
　　2.2方法：
　　采用柱層析、薄層層析、重結(jié)晶等方法分離純化化合物并利用UV、IR、MS、核磁共振等方法鑒定化合物。采用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)藥材中的總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定，以芹菜素為對(duì)照，檢測(cè)波長(zhǎng)為268nm；采用TLC法鑒別大蝎子草中東莨菪內(nèi)酯；采用 HP

6、LC法測(cè)定東莨菪內(nèi)酯含量，以東莨菪內(nèi)酯為對(duì)照，島津 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，乙腈-0.2％磷酸（25:75）為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)298 nm，柱溫30℃。
　　2.3結(jié)果：
　　分離鑒定出3個(gè)化合物，分別是東莨菪內(nèi)酯、山柰素與β-谷甾醇?？傸S酮含量測(cè)定，芹菜素在1.984～11.904μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，r=0.9999；平均加樣回收率為