攜蜂毒素基因腺病毒載體的構(gòu)建及體外抑瘤實驗研究.pdf

1、目的：將蜂毒素基因置于CMV（cytomegalovirus）啟動子和AFP（α-fetoprotein）轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（rAFP）驅(qū)動下,構(gòu)建重組腺病毒載體,進(jìn)行體外轉(zhuǎn)基因抑瘤實驗,并觀察蜂毒素基因轉(zhuǎn)染對肝癌細(xì)胞惡性度的影響.方法：人工合成蜂毒素基因,用Kozak序列優(yōu)化翻譯起始區(qū),并進(jìn)行人類最適密碼子的轉(zhuǎn)換,然后置于CMV啟動子或rAFP之后,用細(xì)菌內(nèi)高效同源重組法將目的基因重組入腺病毒質(zhì)粒中;將腺病毒質(zhì)粒用PacⅠ酶切線性化后,脂質(zhì)

2、體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行腺病毒的包裝.攜有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌細(xì)胞后,RT-PCR實驗觀察蜂毒素基因是否發(fā)生轉(zhuǎn)錄;采用MTT法和<'3>H-TdR摻入法測定蜂毒素基因轉(zhuǎn)染對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用;采用ELISA雙抗體夾心法定量檢測甲胎蛋白,流式細(xì)胞術(shù)檢測CD51表達(dá)情況,以觀察蜂毒素基因轉(zhuǎn)染對肝癌細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響.并以CMV啟動子作為對照,觀察在rAFP驅(qū)動下,蜂毒素基因轉(zhuǎn)染能否特異性地抑制AFP陽性細(xì)胞的增殖.結(jié)論：蜂毒素基