人LMP-1基因腺病毒重組表達載體的構建及功能鑒定.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩66頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、背景:LIM礦化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)作為一個新的可能參與骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMPs)信號通路的胞內誘導成骨性因子,其具體生物學機制尚不明了。
　　 目的:應用Adeasy-1腺病毒系統(tǒng)構建含人LIM礦化蛋白-1(LIMmineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重組表達載體,并感染犬骨髓間

2、充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),檢測LMP-1基因在體外的表達及研究其誘導成骨機制。
　　 方法:擴增、制備pAdTrack-CMV和pUC57-LMP-I,經Kpn I、HindⅢ雙酶切,酶切產物連接形成pAdTrack-CMV-LMP-1,經PmeI線性化后在BJ5183內與pAdeasy-1同源重組,構建重組腺病毒質粒pAd-LMP-1。經人胚胎腎293細胞(

3、HEK293)包裝、擴增后得到復制缺陷重組腺病毒Ad-LMP-1,擴增純化后測定滴度,以最佳MOI值體外感染犬BMSCs,行RT-PCR及Western Blot檢測LMP-1、犬BMP-7基因的表達。重組Ad-LMP-1和(或)外源性重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(rhBMP-7)處理犬BMSCs,21d后行礦化(鈣)結節(jié)茜素紅染色研究LMP-1基因的誘導成骨機制。
　　 結果:①經鑒定Ad-LMP-1構建成功,在HEK293中包裝

4、擴增后滴度約2.2x109efu/ml。②以MOI值100感染犬BMSCs可以獲得最佳感染效率,感染后的犬BMSCs能在基因和蛋白水平上表達LMP-1,但是并未引起犬BMP-7基因的表達。③犬BMSCs經Ad-LMP-1和(或)rhBMP-7處理后21d,Ad-LMP-1或rhBMP-7均不能單獨促使BMSCs向成骨細胞轉化,Ad-LMP-1與外源性的rhBMP-7表現(xiàn)為協(xié)同效應,共同促使BMSCs向成骨細胞轉化。
　　 結論:

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論