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1、[目的]: 應(yīng)用Ad-Easy腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建攜帶抑癌基因PTEN的重組腺病毒表達載體。為進一步研究PTEN基因應(yīng)用于癌癥基因治療提供實驗基礎(chǔ)。 [方法]: 用插入有抑癌基因PTEN和綠色熒光蛋白的穿梭載體pAdTraek-CMV轉(zhuǎn)化已經(jīng)含有腺病毒骨架載體 pAdEasyl 的 Ecoli BJ5183(Ad-1 cells)進行同源重組，獲得重組腺病毒質(zhì)粒，經(jīng)Pac Ⅰ線性化后，轉(zhuǎn)染293細胞。Western
2、blot檢測PTEN蛋白的表達。通過感染293細胞測定病毒滴度，感染MCF-7乳腺癌細胞測定病毒轉(zhuǎn)染效率。感染人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM作Ad-PTEN功能的檢測。 [結(jié)果]: 得到重組腺病毒表達載體Ad-PTEN，轉(zhuǎn)染重組腺病毒DNA的293細胞出現(xiàn)細胞病變，經(jīng)PCR對傳代的Ad-PTEN分析證實得到目的基因PTEN，熒光顯微鏡下能觀察到293細胞內(nèi)有綠色熒光。在293細胞內(nèi)，Western blot檢測到特
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