裂解型基因重組腺病毒對人黑色素瘤細(xì)胞及小鼠肝癌抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建裂解型腺病毒載體，研究其體外對黑色素瘤細(xì)胞及小鼠腹水型肝癌的抑制作用。 方法：利用本室已構(gòu)建的pUCm-T-E1A質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR，將目的片段用HindⅢ、EcoRV雙酶切后連接到帶有GFP標(biāo)記的pAdTrack-CMV質(zhì)粒上，PmeI線性化重組質(zhì)粒pAdTrack-CMV-E1A與腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183細(xì)菌，獲得重組腺病毒表達(dá)載體pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-E1A經(jīng)pa

2、cI線性化后轉(zhuǎn)染QBI-293A細(xì)胞；收獲病毒重組子。將獲得的重組病毒子感染A375黑色素瘤細(xì)胞。然后分別用RT-PCR、流式細(xì)胞儀及MTT法等方法鑒定E1A基因的表達(dá)并且研究其對小白鼠腹水型肝癌的抑制及其免疫功能的影響。 結(jié)果：成功構(gòu)建了裂解型腺病毒Ad-E1A，可顯著裂解A375黑色素瘤細(xì)胞，抑制細(xì)胞生長。Ad-E1A可體內(nèi)抑制小鼠腹水型肝癌的生長，且對小鼠的免疫器官沒有抑制，同時(shí)可提高中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的數(shù)目。