多基因聯(lián)合治療小鼠黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　研究重組質(zhì)粒pEGFP-N1-IL-24基因及pGEG-IL-12基因單獨(dú)應(yīng)用與聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠黑色素瘤移植瘤的抑制作用及作用機(jī)制。
　　方法：
　　復(fù)蘇培養(yǎng)B16細(xì)胞株，取6周齡C57BL/6小鼠,背部接種，構(gòu)建小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞荷瘤模型。小鼠接種12d后，背部長(zhǎng)出直徑約0.05cm的瘤體。將模型小鼠隨機(jī)分成5組，每組8只，分別向瘤體內(nèi)注射脂質(zhì)體包裹的基因重組質(zhì)粒pEGFP-N1-IL-24（IL-24

2、組），pEGFP-N1-IL-24與pGEG-IL-12（聯(lián)合應(yīng)用組），pGEG-IL-12（IL-12組），pEGFP-N1（空質(zhì)粒組）和PBS緩沖液（PBS組）。每次在注射藥物之前，測(cè)量小鼠背部腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑,然后計(jì)算出腫瘤的體積，并繪制腫瘤的生長(zhǎng)曲線。采用HE染色觀察各組腫瘤組織形態(tài)，采用RT-PCR的方法檢測(cè)移植瘤組織中IL-24，IL-12，Bax，Bcl-2,VEGF，caspase-3和caspase-12 mRNA的表

3、達(dá),采用Western Blot蛋白印跡的方法檢測(cè)移植瘤組織中的Bax，Bcl-2，VEGF，caspase-3和caspase-12蛋白的表達(dá)。數(shù)據(jù)用SPSS19.0進(jìn)行分析，結(jié)果用x± s表示。
　　結(jié)果：
　　1.腫瘤的生長(zhǎng)曲線圖表明，IL-24組、IL-12組的瘤體積都明顯小于空質(zhì)粒組、PBS組(P<0.05)，聯(lián)合應(yīng)用組的瘤體積最小(P<0.05)。
　　2.在最后一次基因注射的第7d，將小鼠處死，取腫瘤組織

4、，經(jīng)HE染色觀察各組腫瘤的組織形態(tài)。染色結(jié)果顯示空質(zhì)粒組和PBS組的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，形態(tài)規(guī)則，結(jié)構(gòu)緊密，胞漿內(nèi)可見(jiàn)黑色素形成，大而深染的細(xì)胞核等典型惡性黑素瘤病理特征；重組質(zhì)粒組則多數(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)差，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞皺縮，結(jié)構(gòu)稀疏，細(xì)胞核溶解，變形，細(xì)胞成片壞死。
　　3.采用RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果表明IL-24組和IL-12組分別有IL-24,IL-12基因的mRNA表達(dá)，聯(lián)合應(yīng)用組同時(shí)有兩者的表達(dá)，而空質(zhì)粒組和PBS組均無(wú)；并且

5、IL-24組、IL-12組Bax基因的mRNA表達(dá)水平高于空質(zhì)粒組和PBS組（P<0.05），聯(lián)合應(yīng)用組Bax基因的mRNA表達(dá)水平最高，相比之下，Bcl-2和VEGF基因的mRNA表達(dá)水平則相反（P<0.05）。
　　4.采用 Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示 IL-24組和 IL-12組中Bax,caspase-3,caspase-12蛋白的表達(dá)明顯高于空質(zhì)粒組和PBS組（P<0.05），聯(lián)合應(yīng)用組中Bax,caspas