腺病毒介導(dǎo)的成纖維細胞分泌內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑對惡性黑色素瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：對血管形成進行干涉是腫瘤臨床治療的有效手段。1997年，MichaelS.O'Reilly博士從腫瘤老鼠的尿中發(fā)現(xiàn)了Endostatin，命名為內(nèi)皮抑素。研究顯示內(nèi)皮抑素可多靶點發(fā)揮抗血管生成作用，從而導(dǎo)致腫瘤的休眠及退縮。.但內(nèi)皮抑素性質(zhì)不穩(wěn)定，易失活，難以大量制備；且需每日給藥，較為繁瑣。解決上述困難較好的辦法就是采取基因治療的方法。利用腺病毒載體介導(dǎo)內(nèi)皮抑素的方法成為了研究的熱點。為了保證腺病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素高效表達，我們將

2、已構(gòu)建成功的人分泌性內(nèi)皮抑素腺病毒載體轉(zhuǎn)染成纖維細胞，使其分泌有活性的內(nèi)皮抑素。體外實驗表明感染重組腺病毒后的成纖維細胞表達分泌的內(nèi)皮抑素能抑制血管內(nèi)皮細胞(ECV304)的增殖。本研究的目的是(1)測定腺病毒介導(dǎo)的成纖維細胞體內(nèi)分泌內(nèi)皮抑素的水平；(2)觀察腺病毒介導(dǎo)的成纖維細胞分泌內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑對B16惡性黑色素瘤裸鼠移植瘤生長的影響。 方法：(1)以表達人內(nèi)皮抑素的重組腺病毒感染成纖維細胞，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

3、對感染后的成纖維細胞體內(nèi)及體外分泌內(nèi)皮抑素的水平進行測定。(2)用B16惡性黑色素瘤細胞株建立裸鼠的腫瘤移植模型，隨機分組并設(shè)立對照，分別予人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒、順鉑、重組人內(nèi)皮抑素、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞聯(lián)合順鉑、重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑及轉(zhuǎn)染空載體的腺病毒感染的成纖維細胞進行干預(yù)，計算腫瘤體積及抑瘤率，免疫組化法測微血管密度(MVD)及瘤體VEGF的表達。數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件

4、進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：(1)注射人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染后的成纖維細胞24小時后，小鼠體內(nèi)的內(nèi)皮抑素水平即升至113.4ng/ml，直到第六天濃度恢復(fù)至注射前水平。(2)在裸鼠的惡性黑色素瘤移植模型上，與對照組的裸鼠比較，注射人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞組、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒組、順鉑組、重組人內(nèi)皮抑素組、人內(nèi)皮抑素重組腺病毒感染的成纖維細胞聯(lián)合順鉑組及重組人內(nèi)皮抑素聯(lián)合順鉑組的抑瘤率分別為53.41％、35.06％、4

5、5.72％、17.52％、84.64％和59.40％，腫瘤的生長明顯受到抑制(p<0.05)。感染的成纖維細胞組腫瘤體積與重組腺病毒組、重組人內(nèi)皮抑素組相比減小(p<0.05)。各聯(lián)合組的腫瘤生長受抑與順鉑組間有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示對照組腫瘤的微血管密度及VEGF的表達最高，與其它各組之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)，感染的成纖維細胞組腫瘤的微血管密度與重組腺病毒組、重組人內(nèi)皮抑素組相比降低(p<0.05).各