白藜蘆醇對小鼠黑色素瘤RUNX3基因的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分:白藜蘆醇對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞RUNX3的影響
　　目的:探討RES對小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16F10中RUNX3基因的作用及其機(jī)制。方法:小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16F10,分為5組:對照組,低、中、高劑量RES組(20μM,40μM,80μM),陽性藥物組[5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-CdR),10μM],孵育48h后,用RT-PCR和Western-blotting分別從基因水平和蛋白表達(dá)水平反映RUNX3的

2、變化;用MSP法分析RUNX3啟動子甲基化程度。結(jié)果:1)B16F10細(xì)胞中RUNX3表達(dá)缺失,5-Aza-CdR上調(diào)B16F10細(xì)胞的RUNX3基因和蛋白表達(dá);2)給予RES干預(yù)后,其RUNX3基因和蛋白表達(dá)較對照組均有不同程度的上調(diào),并且呈劑量依賴;3)B16F10細(xì)胞中RUNX3啟動子處于甲基化狀態(tài),給予5-Aza-CdR處理后RUNX3啟動子呈去甲基化狀態(tài),RES低、中、高三個劑量均可以使RUNX3啟動子甲基化程度降低,且呈劑量

3、依賴。
　　第二部分:白藜蘆醇對C57BL小鼠荷黑色素瘤模型RUNX3的影響
　　目的:探討RES對C57BL小鼠荷黑色素瘤模型中RUNX3基因的作用。方法:通過對C57BL小鼠皮下注射B16F10黑色素瘤細(xì)胞,建立皮下移植瘤模型。實驗動物分為4組:模型對照組(10％CMC-Na),低、高劑量RES組(50、100mg/kg/d),連續(xù)灌胃21d;陽性藥物[達(dá)卡巴嗪(DTIC),40mg/kg]組,腹腔注射每三天一次,共21

4、d。末次給藥后測量腫瘤體積和腫瘤組織重量,觀察藥物對腫瘤組織的抑制作用;用RT-PCR法檢測外周血和腫瘤組織中RUNX3mRNA的相對表達(dá);Western-blotting法測定RUNX3蛋白的相對含量。結(jié)果:1)在C57BL移植瘤模型中,低、高劑量RES和DTIC均可使腫瘤體積縮小,分別為對照組的0.83、0.59、0.27倍,其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);2)DTIC對外周血和腫瘤組織RUNX3基因、蛋白表達(dá)沒有影響,而RE