CD147參與白藜蘆醇誘導(dǎo)的人惡性黑色素瘤細(xì)胞G361凋亡及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 探討白藜蘆醇對(duì)人惡性黑色素瘤細(xì)胞株G361的生物學(xué)效應(yīng)及CD147在其中的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1．用不同濃度的白藜蘆醇(Rev)處理人惡性黑色素瘤細(xì)胞株G361，時(shí)間為48h，MTT的方法檢測(cè)不同濃度白藜蘆醇對(duì)G361細(xì)胞增殖的影響。
　　 2．用Westernblot的方法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)G361細(xì)胞株中XIAP，Caspase-9和Caspase-3表達(dá)的影響。
　　

2、3．用RT-PCR、Westernblot的方法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)G361細(xì)胞株中CD147表達(dá)的影響。
　　 4．用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法將CD147全長(zhǎng)cDNA轉(zhuǎn)入G361細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染空載體作為對(duì)照，隨后加或不加白藜蘆醇，分別標(biāo)記為：空載組，CD147轉(zhuǎn)染組，CD147轉(zhuǎn)染組+Rev,用Westernblot的方法檢測(cè)各組細(xì)胞中CD147，XIAP，Caspase-9和Caspase-3蛋白水平的變化。
　　 5．用流式細(xì)胞儀檢

3、測(cè)空載組，CD147轉(zhuǎn)染組，CD147轉(zhuǎn)染組+Rev細(xì)胞的凋亡。
　　 6．電子顯微鏡觀察空載組，CD147轉(zhuǎn)染組，CD147轉(zhuǎn)染組+Rev細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT結(jié)果顯示：白藜蘆醇能抑制人惡性黑色素瘤細(xì)胞株G361細(xì)胞的增殖能力，且隨濃度的增加，抑制能力也相應(yīng)增強(qiáng)，IC50=21.06+-0.383μM，根據(jù)IC50的值，確定后面實(shí)驗(yàn)的藥物作用濃度為OμM，2μM，4μM，8μM，l6

4、μM。
　　 2．不同濃度的白藜蘆醇作用G361細(xì)胞48h后，其X連鎖凋亡抑制蛋白XIAP的表達(dá)水平下調(diào)，而Caspase-9和Caspase-3的表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明白藜蘆醇能促進(jìn)G361細(xì)胞的凋亡。
　　 3．用不同濃度白藜蘆醇處理G361細(xì)胞48h，加藥組細(xì)胞中的CD147mRNA水平低于未加藥組，當(dāng)濃度為2μM，4μM，8μM，16μM時(shí)，比率分別為62.82％，56.27％，50.27％，43.25％(P<0.05)

5、。但加藥組不同濃度間CD147mRNA水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。CD147蛋白水平隨白藜蘆醇濃度的增加降低，呈濃度依賴。根據(jù)已得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇濃度為16μM的白藜蘆醇分別處理G361細(xì)胞Oh，12h，24h，48h，96h，不同作用時(shí)間G361細(xì)胞中的CD147mRNA和蛋白水平并無(wú)明顯改變(P>0.05)。
　　 4．與空載組比較，CD147轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中的CD147和XIAP的蛋白表達(dá)水平上調(diào)，而caspase-3和c

6、aspase-9的蛋白表達(dá)水平降低，用白藜蘆醇處理CD147轉(zhuǎn)染組，下調(diào)CD147的表達(dá)水平，XIAP的蛋白表達(dá)水平也隨之降低，而caspase-3和caspase-9的蛋白表達(dá)水平增高，證明白藜蘆醇能通過(guò)下調(diào)CD147的表達(dá)影響XIAP，Caspase-9和Caspase-3的表達(dá)。
　　 5.CD147轉(zhuǎn)染組用白藜蘆醇干預(yù)后，G361細(xì)胞的凋亡率為2.38％，顯著高于空載組和CD147轉(zhuǎn)染組（P<0.05），空載組的凋亡率為

7、0.76％，而CD147轉(zhuǎn)染組的凋亡率為0.30％，低于空載組，說(shuō)明CD147對(duì)G361細(xì)胞的凋亡有保護(hù)作用，而白藜蘆醇能通過(guò)下調(diào)CD147的表達(dá)誘導(dǎo)G361細(xì)胞的凋亡。
　　 6．CD147轉(zhuǎn)染組+Rev細(xì)胞體積變小，胞質(zhì)濃縮，出現(xiàn)許多空泡化結(jié)構(gòu)，星月狀小體等一系列凋亡細(xì)胞的特征。
　　 結(jié)論:
　　 1．白藜蘆醇能抑制人惡性黑色素瘤細(xì)胞株G361細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡。
　　 2．白藜蘆醇能抑制G36