IL-24基因誘導大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細胞，將從E.coli DH5α中提取的含有IL-24的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染C6細胞，檢測IL-24體外對C6細胞的生長抑制效果，探尋治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的有效方法。
　　方法：用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)E.coli DH5α菌種，從E.coli DH5α培養(yǎng)基中用質(zhì)粒提取試劑盒提取pEGFP-C1載體和pEGFP-IL-24質(zhì)粒，分別用限制性核酸內(nèi)切酶Xho I和EcoR I雙酶切后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，驗證提取質(zhì)粒的準

2、確性，并做質(zhì)粒DNA濃度、純度的測定。體外培養(yǎng)C6細胞，用脂質(zhì)體法將提取的pEGFP-C1和pEGFP-IL-24轉(zhuǎn)染C6細胞，同時設(shè)未處理的C6細胞和加入阿霉素的C6細胞為對照組。在熒光顯微鏡下觀察四組細胞EGFP的表達，以說明是否將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入 C6細胞中。四組細胞在轉(zhuǎn)染48小時后用高倍鏡觀察其形態(tài)學變化；通過吖啶橙/溴化乙錠熒光染色后的不同顏色，辨別C6細胞的存活狀態(tài)；用MTT比色法測定不同時間C6細胞的吸光度值，檢測細胞的生長情況

3、，結(jié)果用-x±s表示，統(tǒng)計軟件做方差分析，P<0.05時有顯著性差異。
　　結(jié)果：從含有pEGFP-C1載體的E.coli DH5α菌種中提取的質(zhì)粒DNA，由限制性核酸內(nèi)切酶酶切后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，有一條約4700bp的片段，與預期的相符。從含有 pEGFP-IL-24的E.coli DH5α菌種中提取的質(zhì)粒DNA，由限制性核酸內(nèi)切酶酶切后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，有兩條條帶，分子量大小約4700bp和660bp，符合pEGF

4、P-C1載體大小和IL-24大小，對照的未經(jīng)酶切的沒有小條帶。做質(zhì)粒純度測定，OD260/OD280約為1.8，質(zhì)粒純度較高。C6細胞經(jīng)各組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1和pEGFP-IL-24的C6細胞有部分發(fā)綠色熒光，而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞沒有綠色熒光，可見能夠?qū)①|(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染進C6細胞中，并在細胞中表達。轉(zhuǎn)染后48小時，四組細胞在高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了pEGFP-IL-24和加入阿霉素的C6細胞，細胞不貼壁

5、，變圓、皺縮，而轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1和未處理的C6細胞，細胞貼壁生長，細胞呈梭形或多角形。四組細胞經(jīng)吖啶橙/溴化乙錠熒光染色后發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了pEGFP-IL-24和加入阿霉素的C6細胞，細胞大多呈橘黃或紅色，部分細胞已裂解，為凋亡細胞，而轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1和未處理的C6細胞，大多
　　細胞質(zhì)著綠色，細胞大而圓，為正常細胞。MTT比色法顯示，轉(zhuǎn)染了pEGFP-IL-24與加入阿霉素的C6細胞相比，C6細胞的生長沒有顯著性差異（P

6、>0.05），而轉(zhuǎn)染了pEGFP-IL-24的C6細胞的生長與轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1或未處理的C6細胞相比，有顯著性差異（P<0.05，P<0.05）。由生長曲線圖可看出轉(zhuǎn)染了pEGFP-C1和空白對照的C6細胞生長曲線相類似，而轉(zhuǎn)染了pEGFP-IL-24和加入阿霉素處理的C6細胞增殖明顯受抑制。
　　結(jié)論：1、成功提取pEGFP-C1載體和pEGFP-IL-24質(zhì)粒，并經(jīng)酶切、電泳驗證了提取質(zhì)粒的準確性。
　　2、采用脂