與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外共培養(yǎng)后大鼠神經(jīng)干細(xì)胞成瘤性的初步觀察.pdf

1、目的： 探索體外腫瘤微環(huán)境中正常大鼠神經(jīng)干細(xì)胞是否可以發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化而具有相關(guān)腫瘤學(xué)特性。 方法： 1.利用共培養(yǎng)池(cell culture transwell inserts)建立兩種細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型。具體分組為：①實(shí)驗(yàn)組：C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞十神經(jīng)干細(xì)胞，②對(duì)照組：星形膠質(zhì)細(xì)胞+神經(jīng)干細(xì)胞，③空白對(duì)照組：無細(xì)胞的培養(yǎng)液+神經(jīng)干細(xì)胞。 2.應(yīng)用相差顯微鏡及電鏡觀察共培養(yǎng)后NSCs的形態(tài)變化。 3.

2、四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs的增殖變化。 4.免疫熒光細(xì)胞染色技術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs P53蛋白表達(dá)情況。 5.染色體核型分析檢測(cè)共培養(yǎng)后NSCs的染色體變化。 6.將共培養(yǎng)后NSCs接種于裸鼠顱內(nèi)觀察成瘤情況。 結(jié)果： 1.成功建立兩種細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型。 2.共培養(yǎng)后NSCs形態(tài)變化：①相差顯微鏡下觀察

3、可見：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7天后NSCs較對(duì)照組細(xì)胞球體積變大、細(xì)胞數(shù)目相對(duì)較多，鏡下可見與對(duì)照組在形態(tài)上有較明顯的差別；②電鏡下觀察可見：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7天后NSCs細(xì)胞核較大，核質(zhì)比較高，染色質(zhì)疏松，細(xì)胞器也較發(fā)達(dá)(粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體較多)。對(duì)照組NSCs胞漿較多，細(xì)胞器欠發(fā)達(dá)。 3.MTT法檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組中與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的NSCs增殖較對(duì)照組快。 4.實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)7、14天后NSCs細(xì)胞

4、核上未見P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)，共培養(yǎng)28天后部分NSCs細(xì)胞核上P53蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)；對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后NSCs細(xì)胞核上P53蛋白均未見陽(yáng)性表達(dá)。 5.實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs核型分析結(jié)果均為正常。 6.實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白對(duì)照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs接種裸鼠顱內(nèi)均未見腫瘤形成。 結(jié)論： 1.C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)體外共培養(yǎng)體系中的大鼠神經(jīng)干