CDglyTK雙自殺基因治療C6膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文CDglyTK雙自殺基因治療C6膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究姓名：劉小紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)外科指導(dǎo)教師：鮑修風(fēng)20030406山東大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要CDglyTK雙自殺基因治療c6膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究專業(yè)：神經(jīng)外科研究生：劉小紅導(dǎo)師：鮑修風(fēng)目的膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤的40～45％，雖然應(yīng)用手術(shù)、放療及化療等綜合治療方法，但其療效并不理想，平均生存時(shí)間仍不足～年，因此成為神經(jīng)外科的難題之一，

2、探討新的治療方法具有及其重要的意義。近年來腦膠質(zhì)瘤的基因治療發(fā)展迅速，應(yīng)運(yùn)而生的方法有自殺基因、免疫基因、多藥耐藥基因以及抗血管生成基因等，其中自殺基因被認(rèn)為是最有前景的基因治療方法，它又稱病毒介導(dǎo)的酶，藥物前體療法(VDEPT)，是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將哺乳動(dòng)物細(xì)胞中所不含有的自殺基因轉(zhuǎn)入到哺乳動(dòng)物腫瘤細(xì)胞中，該基因表達(dá)的產(chǎn)物可將無毒的藥物前體轉(zhuǎn)化為毒性藥物，從而選擇性殺傷該腫瘤細(xì)胞，常用的自殺基因有單純皰疹病毒胸苷激酶基因(HSV—TK)

3、和大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶基因(CD)，前者催化無毒性抗病毒核苷類似物如丙氧烏苷(GCV)、無環(huán)鳥苷(ACV)等成為單磷酸核苷衍生物(dⅢP)，然后在內(nèi)源性細(xì)胞激酶作用下轉(zhuǎn)化為具有明顯毒性的三磷酸核苷(drrP)，作為DNA合成鏈的終止劑和DNA合成酶的抑制劑，干擾細(xì)胞DNA的合成；后者編碼的胞嘧啶脫氨酶可催化5氟胞嘧啶(5FC)脫氨成為5氟尿嘧啶(5FU)，然后代謝為有毒性的5一氟尿嘧啶一57三磷酸(5FUTP)和5一氟一27脫氧尿嘧啶5

4、7磷酸(5FdUTP)，5FUTP通過與UTP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合而抑制mRNA和tRNA的合成，5FdUTP則作用于胸苷合成酶(TS)，導(dǎo)致TMP衰竭而阻止DNA的合成，最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。聯(lián)合基因治療已成為基因治療的新領(lǐng)地，其有單基因治療無可比擬的優(yōu)越性，本研究將CDTK融合基因轉(zhuǎn)染C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)行前體藥物治療的體內(nèi)、外試驗(yàn)，探討其對(duì)C6膠質(zhì)瘤的殺傷作用及旁觀者效應(yīng)，以尋求有效的自殺基因治療方法。方法利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體