人IL-24基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其抗腫瘤特性的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素24（IL-24）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤細(xì)胞抑制因子，在腫瘤的基因治療方面具有極大的應(yīng)用價(jià)值。但是到目前為止，還沒(méi)有很好的體外大量表達(dá)可溶性IL-24蛋白的方法，并且IL-24抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的分子機(jī)制也沒(méi)有研究清楚，這嚴(yán)重制約了IL-24在腫瘤臨床治療上的大規(guī)模應(yīng)用。本論文將從IL-24的原核表達(dá)、純化、抗腫瘤特性的鑒定和抗腫瘤機(jī)制等方面進(jìn)行研究。
　　通過(guò)PCR擴(kuò)增人IL-24基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒PET-ELP-Int

2、ein-IL-24，利用ELP-intein系統(tǒng)成功表達(dá)并純化出了可溶性的IL-24蛋白。使用含15mg/L純化的IL-24蛋白的培養(yǎng)基培養(yǎng)肝癌細(xì)胞HepG224h后，細(xì)胞的凋亡率與對(duì)照組相比增加了35％左右，說(shuō)明原核表達(dá)獲得的IL-24蛋白仍然具有抗腫瘤生物學(xué)活性。
　　為了研究IL-24抗腫瘤的分子機(jī)制，將IL-24及其互作蛋白基因HLA-C和NDUFA13轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞后，通過(guò)免疫共沉淀（CO-IP）實(shí)驗(yàn)證明了IL-24

3、與HLA-C、NDUFA13在胞外存在相互作用。通過(guò)三種蛋白的定位實(shí)驗(yàn)和熒光能量共振轉(zhuǎn)移（FRET）實(shí)驗(yàn)證明了IL-24與HLA-C、NDUFA13在細(xì)胞內(nèi)也存在相互作用?；プ鞯鞍椎蔫b定使我們?cè)贗L-24抗腫瘤分子機(jī)制的研究上更進(jìn)了一步。
　　本研究第一次在大腸桿菌中過(guò)量表達(dá)并進(jìn)一步純化出可溶并具有生物學(xué)活性的IL-24蛋白，為IL-24蛋白的大規(guī)模原核表達(dá)提供了一定的理論依據(jù)。IL-24與HLA-C、NDUFA13胞內(nèi)定位及互作