版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、p18基因全長3232bp，含有2個外顯子，編碼區(qū)位于第1外顯子內(nèi)編碼522bp，GC含量高達90％。以往研究表明，p18基因與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)。生物信息學(xué)分析，P18蛋白分子量約18.9kD，存在4次跨膜的結(jié)構(gòu)域。通過膠體金定位分析，確定P18蛋白亞細胞定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體。由于p18基因編碼區(qū)高GC含量和P18蛋白的高疏水性，p18基因的可溶性表達存在著很大的困難。
本研究根據(jù)生物信息學(xué)分析P18蛋白的疏水性和二級結(jié)構(gòu)特
2、點，構(gòu)建了p18基因不同的截短體，嘗試p18基因截短體的可溶性表達。根據(jù)外源基因與一些易表達的序列共翻譯能大幅提高表達水平，將目的基因構(gòu)建到谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶（GST）融合表達的載體中形成重組體，在大腸桿菌和酵母中摸索最佳表達條件，最終表達出攜帶目的蛋白的GST融合蛋白。進一步利用谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析對目的蛋白進行純化。
實驗結(jié)果表明，轉(zhuǎn)入重組體pGEX-6P-1-p18-280、pGEX-6P-1-p18-397、pGEX-
3、6P-1-p18-433的大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株在37℃、1mMIPTG濃度下能夠大量表達，但經(jīng)可溶性分析得知，這些表達的蛋白絕大部分為包涵體。優(yōu)化誘導(dǎo)條件后，轉(zhuǎn)入上述重組體的大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株在16℃、0.1mMIPTG濃度下獲得了可溶性表達。轉(zhuǎn)入重組體pYES2-GST-p18的酵母INVSc1在30℃、2％半乳糖誘導(dǎo)72h條件下，經(jīng)純化也得到了可溶性的GST-P18融合蛋白，但其表達量遠沒有在大腸桿
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 酵母甘油合成關(guān)鍵酶基因在大腸桿菌中的表達研究.pdf
- 人LIGHT基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達研究.pdf
- 雪蓮PEBP基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達.pdf
- 酵母菌谷胱甘肽高產(chǎn)基因在大腸桿菌里的表達.pdf
- 人FL基因在大腸桿菌中的表達研究.pdf
- 蚓激酶基因在大腸桿菌中的高效表達.pdf
- 人α-防御素基因在大腸桿菌中的表達.pdf
- A型肉毒毒素Hc段基因在大腸桿菌及畢赤酵母中的表達.pdf
- 大腸桿菌中的基因表達
- 鮭魚降鈣素基因在大腸桿菌中的表達純化及藥理活性研究.pdf
- 53377.大腸桿菌膽堿脫氫酶基因在畢氏酵母pichiapastoris中的表達
- 芍藥ACO和ACS基因在大腸桿菌中的高效表達.pdf
- 人瘦蛋白基因在大腸桿菌中表達的研究.pdf
- 54535.新型人降鈣素基因在大腸桿菌中的表達
- 麻疹核蛋白基因在大腸桿菌和家蠶中的表達及鑒定.pdf
- 淀粉液化芽孢桿菌中性植酸酶基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的高效表達.pdf
- 人-鮭降鈣素嵌合基因在大腸桿菌中的串聯(lián)表達.pdf
- 凡納濱對蝦溶菌酶基因在大腸桿菌和酵母中的重組表達和活性檢測.pdf
- 小牛凝乳酶基因在大腸桿菌中可溶性表達研究.pdf
- 抗菌肽CMIV基因在大腸桿菌中的表達與純化.pdf
評論
0/150
提交評論