C6-IL-24對(duì)鼠腦膠質(zhì)瘤治療作用的研究.pdf

1、目的：腦部膠質(zhì)瘤尤其是高級(jí)別膠質(zhì)瘤是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。因其向腦組織內(nèi)呈浸潤(rùn)生長(zhǎng)，腦組織又缺乏有效的免疫系統(tǒng)，故常規(guī)治療(手術(shù)加放化療)效果差且易復(fù)發(fā)，病人的平均生存期不足一年，是目前神經(jīng)外科學(xué)界正著力解決的問(wèn)題。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤基因治療的新方法在不斷被發(fā)現(xiàn)。通過(guò)各種載體將具有抗腫瘤作用的基因?qū)氲侥[瘤細(xì)胞內(nèi)，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)甚至使腫瘤細(xì)胞的惡性行為發(fā)生逆轉(zhuǎn)，是目前實(shí)驗(yàn)中常規(guī)應(yīng)用的基因治療的方法。 新近研究表

2、明：中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以通過(guò)頸部淋巴結(jié)獲得系統(tǒng)的免疫效應(yīng)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抗原能被提呈給外周的免疫細(xì)胞，外周的具有免疫活性的淋巴細(xì)胞再遷移入中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)發(fā)揮作用。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)：IL-2、IL-4、IL-12等細(xì)胞因子可以有效治療和預(yù)防顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的發(fā)展。并且有些研究已進(jìn)入二期臨床階段。隨著有關(guān)研究的不斷深入，細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫基因治療將為腦部惡性膠質(zhì)瘤的治療開(kāi)闊新的前景。 白細(xì)胞介素24(interleukin-24，IL-24)

3、IL-24是一種新發(fā)現(xiàn)的具有細(xì)胞因子特性和抑瘤因子功能雙重功效的蛋白質(zhì)。關(guān)于IL-24對(duì)腫痛細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，有研究注意到，隨著惡性黑色素瘤的形成、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，IL-24在細(xì)胞中的表達(dá)逐漸下降；而經(jīng)生長(zhǎng)抑制和分化誘導(dǎo)等方法治療該腫瘤后，IL-24的表達(dá)可再度上升，因此認(rèn)為IL-24基因具有抑癌基因的特性，與抑制腫瘤的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腫瘤逆轉(zhuǎn)和分化有關(guān)。而且當(dāng)用質(zhì)?；蛳俨《据d體將IL-24基因轉(zhuǎn)入乳腺癌、肺癌等細(xì)胞株后，可選擇性誘發(fā)腫瘤細(xì)胞的凋亡

4、。外源性IL-24基因還可通過(guò)抑制腫瘤局部新生血管的形成，達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的目的。 本實(shí)驗(yàn)建立SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型，于荷瘤大鼠的皮下注射C6/IL-24細(xì)胞(通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒將IL-24導(dǎo)入C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)構(gòu)建)，觀察其對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤的治療效果。 方法：C6鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系由河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院科研中心保存并提供。C6/IL-24細(xì)胞系河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)所細(xì)胞生物室建立、保存并提供。純種SD大鼠(平均體重250-350g)，

5、雄性，常規(guī)喂養(yǎng)，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 動(dòng)物模型制作術(shù)前12h大鼠禁食禁水，用0.4％戊巴比妥鈉(10ml/kg)腹腔麻醉后，固定于立定向儀上，剪去頭頂部毛1.5cm×1.5cm,常規(guī)消毒、鋪無(wú)菌巾，切開(kāi)頭皮，暴露顱骨，在前囟后1.0mm、矢狀縫右側(cè)3.0mm處，用牙科鉆鉆一直徑1.0mm的小孔，不可傷及硬腦膜，將連接于定位儀上的微量注射器的針尖調(diào)節(jié)至觸及硬腦膜，進(jìn)針6mm,后退1mm,使針尖距硬腦膜為5mm。將細(xì)胞懸

6、液20μl(約106細(xì)胞)緩慢注入腦內(nèi)，注射時(shí)間為10min,留針5min后，緩慢退針。用骨蠟封閉骨孔，生理鹽水沖洗術(shù)野，縫合皮膚，切口消毒，常規(guī)飼養(yǎng)。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組將24只荷瘤3天的SD大鼠隨機(jī)分為兩組各12只，一組為實(shí)驗(yàn)組，一組為對(duì)照組，其中每組中6只用于觀測(cè)腫瘤大小，另外6只用于觀察存活時(shí)間。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的干預(yù)實(shí)驗(yàn)組皮下注射1×107個(gè)C6/IL-24細(xì)胞，對(duì)照組皮下注射同等體積的生理鹽水。 MR檢測(cè)時(shí)間和

7、方法所有甲組大鼠分別于接種后7天、14天、21天進(jìn)行MRI檢查，觀察實(shí)驗(yàn)大鼠的腫瘤生長(zhǎng)情況，并照相記錄。MRI掃描條件：76mm表面線圈,TR/TE為500/20，層厚2mm,冠狀面T1加權(quán)掃描。掃描前腹腔注射造影劑GDDTPA1ml。腫瘤體積(mm3)=(長(zhǎng)徑×寬徑×2倍層數(shù))×π/6。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組腫瘤生長(zhǎng)速度明顯減慢，實(shí)驗(yàn)組大鼠各時(shí)段腫瘤體積明顯小于對(duì)照組(P＜0.05)(表1、表2、表3)，其中實(shí)驗(yàn)組中有1例完全消失。而

8、對(duì)照組大鼠腦膠質(zhì)瘤體積隨鼠齡的延長(zhǎng)呈現(xiàn)指數(shù)性增長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)組大鼠存活時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，其中實(shí)驗(yàn)組大鼠存活期均超過(guò)52天，兩者存在顯著性差異(P＜0.05) 結(jié)論：建立穩(wěn)定可靠的腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型是進(jìn)行各種腦膠質(zhì)瘤在體實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)。SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型建立后，治療時(shí)機(jī)的選擇尤為重要，治療時(shí)間窗的選擇應(yīng)在腫瘤指數(shù)生長(zhǎng)期以前，此期間進(jìn)行治療干預(yù)能更好地判定治療效果。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒將IL-24導(dǎo)入C6細(xì)胞而形成的C6/IL-24細(xì)胞對(duì)鼠腦