siRNA沉默Survivin對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2的影響.pdf

1、目的:探討siRNA沉默survivin基因表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2周期、增殖、凋亡及Caspase-3酶活性的影響，為鼻咽癌的基因治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：設(shè)計(jì)、合成兩條不同特異性針對(duì)survivin基因的干擾序列 a,b，將干擾序列構(gòu)建至pGP/U6/GFP載體，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞CNE2。采用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率；運(yùn)用 CCK-8試劑法，檢測(cè)細(xì)胞的增殖；使用 Caspase-3試劑盒，檢測(cè)Casp

2、ase-3酶活性。
　　結(jié)果：重組載體pGP/U6/GFP siRNA-Survivin a,b經(jīng)基因測(cè)序鑒定，與設(shè)計(jì)干擾Survivin基因序列堿基插入方向一致，載體構(gòu)建成功。siRNA沉默Survivin基因表達(dá)后，與空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，siRNA-Survivin a組、siRNA-Survivin b組細(xì)胞聚集在G0/G1期，G1期細(xì)胞增加，S期細(xì)胞減少（p﹤0.05）；與空白對(duì)照組比較siRNA-Survivin

3、 a組、siRNA-Survivin b組細(xì)胞增殖受到抑制（p﹤0.05），siRNA-Survivin b組與siRNA-Survivin a組比較，細(xì)胞增值受抑制更明顯（p﹤0.05）； siRNA-Survivin b組凋亡率為（39.5％±0.79）高于空白對(duì)照組（2.65％±0.41）、脂質(zhì)體組（3.25％±0.52）、陰性對(duì)照組（4.16％±0.62）及siRNA-Survivin a組（37.2％±0.71）（p﹤0.05

4、）；Caspase-3酶活性檢測(cè)表明，與空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，siRNA-Survivin a組、siRNA-Survivin b組Caspase-3酶活性增強(qiáng)（p﹤0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. siRNA沉默Survivin基因表達(dá)后，可抑制鼻咽癌細(xì)胞CNE2增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，對(duì)G0/G1期有阻滯作用。
　　2. siRNA沉默Survivin基因表達(dá)后，鼻咽癌細(xì)胞CNE2中Caspase-3酶活性增強(qiáng)