STGC3基因在鼻咽癌細(xì)胞系CNE2中抑瘤機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：前期研究顯示STGC3高表達(dá)，可以抑制CNE2細(xì)胞的生長，為進(jìn)一步研究STGC3基因的抑瘤作用，觀測(cè)STGC3基因高表達(dá)對(duì)CNE2裸鼠體內(nèi)成瘤的影響，并探討其可能作用機(jī)制。 方法：采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2細(xì)胞系接種于裸鼠皮下，Dox誘導(dǎo)STGC3基因高表達(dá)，觀測(cè)STGC3基因高表達(dá)對(duì)CNE2裸鼠體內(nèi)成瘤的影響。運(yùn)用RT-PCR、免疫組織化學(xué)及蛋白質(zhì)免疫印跡方法，分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平，分析瘤組織中ST

2、GC3基因表達(dá)；采用HE染色觀察瘤組織形態(tài)學(xué)改變；用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)移植瘤組織中細(xì)胞的凋亡情況；用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)移植瘤組織凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)。運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)，如二維電泳、圖像分析、質(zhì)譜技術(shù)等方法，分析STGC3 對(duì)移植瘤組織中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響，篩選和鑒定與STGC3抑瘤作用相關(guān)的差異蛋白質(zhì)。應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡驗(yàn)證熱休克蛋白70在裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)情況。 結(jié)果：STGC3蛋白質(zhì)表達(dá)主要定位于

3、細(xì)胞核內(nèi)，Dox誘導(dǎo)STGC3基因在Tet/pTRE-STGC3/CNE2細(xì)胞系高表達(dá)后，Tet/pTRE-STGC3/CNE2細(xì)胞系裸鼠體內(nèi)成瘤受到明顯抑制，與對(duì)照組比較，移植瘤成瘤時(shí)間晚、生長慢、腫塊小、細(xì)胞凋亡率高；Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，Bax蛋白表達(dá)增強(qiáng)，差異有顯著性意義(P<0.01)；蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：STGC3在移植瘤組織中高表達(dá)，肽酰輔氨酰順反式異構(gòu)酶 A，絲切蛋白-1，抑制素和G蛋白表達(dá)上調(diào)，絲氨酸-蘇氨酸蛋白激

4、酶 WNK1，絲氨酸-蘇氨酸二肽富含性剪切因子 1和熱休克蛋白70表達(dá)下調(diào)。這些蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞骨架重構(gòu)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖、細(xì)胞免疫、分子伴侶和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡驗(yàn)證熱休克蛋白70在裸鼠移植瘤組織中的表達(dá)情況，結(jié)果與蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，說明蛋白組學(xué)結(jié)果較準(zhǔn)確的反映了裸鼠移植瘤組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。 結(jié)論： 1.STGC3高表達(dá)，使Bcl-2/Bax比值下降，促進(jìn)CNE2細(xì)胞凋亡，抑制CNE2裸鼠移植瘤