敲低SAA基因表達(dá)對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　利用shRNA技術(shù)沉默血清淀粉樣蛋白 A（SAA）表達(dá)，檢測(cè)該基因表達(dá)降低對(duì)人鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響，為揭示SAA基因表達(dá)功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用shRNA技術(shù)，構(gòu)建3組針對(duì)SAA基因的shRNA真核表達(dá)干擾載體，并進(jìn)行測(cè)序及blast對(duì)比鑒定；將shRNA真核表達(dá)干擾載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，通過(guò)PT-PCR及Western-blotting技術(shù)，篩選出有效的小干擾RN

2、A(siRNA)序列；利用shRNA技術(shù)和高表達(dá)載體分別沉默及過(guò)表達(dá)SAA基因，分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CNE2細(xì)胞后，檢測(cè)及驗(yàn)證該基因在 CNE2細(xì)胞中的表達(dá)水平；運(yùn)用MTT及Hoechst33258熒光染色技術(shù)，觀察及分析SAA基因的表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞的生長(zhǎng)及凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　成功構(gòu)建針對(duì)SAA基因的shRNA真核表達(dá)干擾載體組，經(jīng)測(cè)序鑒定、blast對(duì)比、 PT-PCR及Western-blotting檢測(cè)，確定pGP

3、U6/GFP/Neo-SAA-homo-482為針對(duì)SAA基因設(shè)計(jì)的最有效的干擾RNA。將pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482和pCD3.1（+）-SAA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，PT-PCR及Western-blotting結(jié)果顯示：pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干擾載體可有效沉默CNE2細(xì)胞中的SAA蛋白,pCDNA3.1（+）-SAA真核過(guò)表達(dá)載體可有效地過(guò)表達(dá)SAA蛋白，且其結(jié)果具有