LPS誘導(dǎo)YH1基因在鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)該細(xì)胞生長的影響.pdf

1、【目的】
　　 探測LPS可否誘導(dǎo)YH1(PLUNC)基因在人低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z細(xì)胞內(nèi)表達(dá)及研究YH1基因表達(dá)后對(duì)人低分化鼻咽癌細(xì)胞株細(xì)胞生長增殖的影響,進(jìn)一步探討YH1基因在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　 【方法】
　　 為實(shí)現(xiàn)本課題研究目的,RPMI1640培養(yǎng)基,10％小牛血清培養(yǎng)CNE-1/CNE-2Z細(xì)胞,待細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí),采用以下方法分別實(shí)驗(yàn):
　　 1.實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

2、(Real Time PCR)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測LPS刺激人低分化的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z后YH1 mRNA表達(dá)水平。
　　 2.Western blot檢測LPS刺激CNE-2Z細(xì)胞后YH1蛋白的表達(dá)水平。
　　 3.用重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA4/His/Max-YH1轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,并用Western blot檢測YH1蛋白的表達(dá)水平。
　　 4.MTT檢測LPS誘導(dǎo)Y

3、H1高表達(dá)后對(duì)CNE-2Z細(xì)胞生長增殖的影響。
　　 5.激光掃描共聚焦顯微鏡觀察YH1蛋白在CNE1/CNE-2Z細(xì)胞中的定位。
　　 【結(jié)果】
　　 1.不同濃度LPS刺激CNE-2Z細(xì)胞,YH1 mRNA表達(dá)水平隨著LPS劑量的加大逐漸升高,至100ng/μl時(shí)達(dá)到最高,繼續(xù)增加LPS濃度,YH1 mRNA表達(dá)水平不再增加。100ng/μl LPS刺激CNE-2Z細(xì)胞不同時(shí)間,在最初刺激的4小時(shí)內(nèi)YH1mR

4、NA表達(dá)水平有明顯增加,然后迅速下降,而24小時(shí)再次增加至3.5倍。
　　 2.不同濃度LPS刺激CNE-2Z細(xì)胞24小時(shí),YH1蛋白表達(dá)水平隨著LPS劑量的加大逐漸升高,至100ng/μl時(shí)達(dá)到最高,與YH1 mRNA一致,也呈明顯的劑量依賴效應(yīng)。
　　 3.LPS誘導(dǎo)YH1高表達(dá)后能明顯抑制CNE-2Z細(xì)胞的生長增殖。加入LPS組與對(duì)照組細(xì)胞細(xì)胞生長變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000＜0.05),pcDNA4/His/