Kiss-1-hOT7T175基因在不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細(xì)胞株中的表達(dá)探討.pdf

1、目的：Kiss-1/hOT7T175基因是新近發(fā)現(xiàn)的一對與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因，其表達(dá)的多種調(diào)控機(jī)制與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，并已在多種惡性腫瘤中得到證實(shí)。目前，其在鼻咽癌中的研究還鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)檢測Kiss-1/hOT7T175基因在不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細(xì)胞株 CNE-1(高分化鱗癌)、CNE-2Z(低分化鱗癌)、SUNE-1(低分化鱗癌癌細(xì)胞系)、SUNE-1-5-8F(高成瘤，高轉(zhuǎn)移)、SUNE-1-6-10B(成瘤，低轉(zhuǎn)移

2、)中的蛋白和 mRNA水平的表達(dá)情況，以探討該對基因在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用，并為課題組下一步實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞理論基礎(chǔ)。
　　方法：分別應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(revers transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)，免疫組織化學(xué)法在mRNA和蛋白水平檢測不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-

3、1和hOT7T175的表達(dá)：(1)體外培養(yǎng)的各細(xì)胞株生長到細(xì)胞密度為5×104個(gè)/ml時(shí)，收集細(xì)胞，用 Trizol法提取細(xì)胞 RNA，應(yīng)用 RT-PCR檢測 CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-1mRNA和hOT7T175mRNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次；(2)將各細(xì)胞株以5×104/ml的細(xì)胞密度接種在已鋪有無菌蓋玻片的6孔板內(nèi)，37oC，5％CO2生長48小時(shí)后取出蓋玻片

4、，在室溫下按照免疫組織化學(xué)試劑盒的步驟進(jìn)行操作，用免疫組織化學(xué)法檢測各細(xì)胞株中 Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細(xì)胞株均表達(dá)Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白，且Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白在表達(dá)水平上具有正相關(guān)性(p<0.05， r=0.958)。
　　2.不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細(xì)胞株均擴(kuò)增出 Kiss-1mRNA，而hOT7T175mRNA在高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株

5、 SUNE-1-5-8F中未擴(kuò)增出。且Kiss-1和hOT7T175基因在mRNA表達(dá)水平上具有正相關(guān)性(p<0.05，r=0.923)。
　　3.在低轉(zhuǎn)移性細(xì)胞株SUNE-1-6-10B中Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)都顯著高于其他具有較高轉(zhuǎn)移習(xí)性細(xì)胞株中的表達(dá)(P<0.01)。
　　結(jié)論：1) Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)具有一致性，隨著Kiss-1表