Kiss-1-hOT7T175基因在不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細胞株中的表達探討.pdf

1、目的：Kiss-1/hOT7T175基因是新近發(fā)現(xiàn)的一對與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因，其表達的多種調(diào)控機制與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，并已在多種惡性腫瘤中得到證實。目前，其在鼻咽癌中的研究還鮮見文獻報道。本實驗檢測Kiss-1/hOT7T175基因在不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細胞株 CNE-1(高分化鱗癌)、CNE-2Z(低分化鱗癌)、SUNE-1(低分化鱗癌癌細胞系)、SUNE-1-5-8F(高成瘤，高轉(zhuǎn)移)、SUNE-1-6-10B(成瘤，低轉(zhuǎn)移

2、)中的蛋白和 mRNA水平的表達情況，以探討該對基因在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用，并為課題組下一步實驗提供細胞理論基礎(chǔ)。
　　方法：分別應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈式反應(yīng)(revers transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)，免疫組織化學(xué)法在mRNA和蛋白水平檢測不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細胞株CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-

3、1和hOT7T175的表達：(1)體外培養(yǎng)的各細胞株生長到細胞密度為5×104個/ml時，收集細胞，用 Trizol法提取細胞 RNA，應(yīng)用 RT-PCR檢測 CNE-1、CNE-2Z、SUNE-1、SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B中Kiss-1mRNA和hOT7T175mRNA的表達，實驗重復(fù)4次；(2)將各細胞株以5×104/ml的細胞密度接種在已鋪有無菌蓋玻片的6孔板內(nèi)，37oC，5％CO2生長48小時后取出蓋玻片

4、，在室溫下按照免疫組織化學(xué)試劑盒的步驟進行操作，用免疫組織化學(xué)法檢測各細胞株中 Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白的表達。
　　結(jié)果：1.不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細胞株均表達Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白，且Kiss-1蛋白和hOT7T175蛋白在表達水平上具有正相關(guān)性(p<0.05， r=0.958)。
　　2.不同轉(zhuǎn)移習(xí)性的人鼻咽癌細胞株均擴增出 Kiss-1mRNA，而hOT7T175mRNA在高轉(zhuǎn)移性細胞株

5、 SUNE-1-5-8F中未擴增出。且Kiss-1和hOT7T175基因在mRNA表達水平上具有正相關(guān)性(p<0.05，r=0.923)。
　　3.在低轉(zhuǎn)移性細胞株SUNE-1-6-10B中Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表達都顯著高于其他具有較高轉(zhuǎn)移習(xí)性細胞株中的表達(P<0.01)。
　　結(jié)論：1) Kiss-1和hOT7T175基因在蛋白水平和mRNA水平的表達具有一致性，隨著Kiss-1表