PCDH8基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞株CNE-1作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討PCDH8基因表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞體外增殖、周期、侵襲、藥物敏感性等生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究。
　　 方法：采用脂質(zhì)體介導(dǎo)將質(zhì)粒pcDNA3.1-PCDH8（實(shí)驗(yàn)組）與質(zhì)粒pcDNA3.1（對(duì)照組）轉(zhuǎn)染至鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1，應(yīng)用RT-PCR、Westernblot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后CNE-1細(xì)胞中PCDH8 mRNA及蛋白的表達(dá)情況;通過CCK-8細(xì)胞生長曲線試驗(yàn)，流式細(xì)胞周期試驗(yàn)，Transwell侵襲試驗(yàn)、CCK-

2、8細(xì)胞藥物敏感性試驗(yàn)及裸鼠皮下種植瘤模型，進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)染PCDH8基因的細(xì)胞株CNE-1的增殖能力、生長周期、細(xì)胞侵襲能力、對(duì)化療藥物的敏感性及其體內(nèi)成瘤能力進(jìn)行分析，并與轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的細(xì)胞株進(jìn)行對(duì)比。通過Real time PCR檢測實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組MMP-9、MMP-2、VEGF基因mRNA水平表達(dá)變化，Western blot檢測實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組CDK-4、P21、P27、JNK基因蛋白水平表達(dá)變化，了解PCDH8基因在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)的作

3、用機(jī)制。
　　 結(jié)果：①RT-PCR、Western blot檢測表明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-PCDH8的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株中PCDH8 mRNA及蛋白成功表達(dá)并明顯高于轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1的對(duì)照組細(xì)胞株(P＜0.05)。②CCK-8細(xì)胞生長曲線試驗(yàn)表明試驗(yàn)組細(xì)胞株的生長速度明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。③流式細(xì)胞周期試驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株G0/G1期較對(duì)照組增加，S期細(xì)胞較對(duì)照組減少(P＜0.05);④Tramswell侵襲試

4、驗(yàn)表明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞株侵襲能力明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。⑤CCK-8細(xì)胞藥物敏感性試驗(yàn)表明PCDH8基因表達(dá)能顯著提高鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1對(duì)順鉑化療藥物的敏感性(P＜0.05);⑥裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型中表達(dá)PCDH8基因的實(shí)驗(yàn)組CNE-1細(xì)胞的成瘤能力低于對(duì)照組CNE-1細(xì)胞(P＜0.05)。⑦Realtime PCR試驗(yàn)證明在mRNA水平上MMP-9在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)量低于對(duì)照組(P＜0.05)，而MMP-2、VEGF在實(shí)驗(yàn)組的表

5、達(dá)量與對(duì)照組無明顯差別(P＞0.05);⑧Western bolt試驗(yàn)中CDK-4、P27、JNK基因在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)高于實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)(P＜0.05)。P21在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)高于對(duì)照區(qū)但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：脂質(zhì)體成功介導(dǎo)pcDNA3.1-PCDH8與pcDNA3.1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入鼻咽癌CNE-1細(xì)胞株并建立穩(wěn)定細(xì)胞株。PCDH8基因的表達(dá)能降低CNE-1細(xì)胞的增殖、侵襲能力，延緩細(xì)胞分裂周期，提高對(duì)順鉑化