X線照射對人鼻咽鱗癌CNE-1細胞株耐藥基因及其蛋白表達的影響.pdf

1、目的：目前對惡性腫瘤主要采取綜合治療的原則，放射治療和化學治療的結合是目前臨床應用最為廣泛的一種綜合治療模式。二者的結合應用能提高腫瘤療效已在臨床中得到證實，然而臨床治療中我們也可以觀察到放射治療后，腫瘤對化療藥物的敏感性下降，其機理尚不清楚。放射治療會引起腫瘤細胞多藥耐藥基因及其蛋白的過度表達可能是導致腫瘤細胞對化療藥物敏感性降低的主要原因之一。本實驗模擬臨床常規(guī)分割放療方法對鼻咽鱗癌CNE-1細胞進行分次X射線照射，檢測X線照射前與

2、照射后一段時間內鼻咽鱗癌CNE-1細胞對化療藥物順鉑(cisplatin，DDP)敏感性的變化，同時檢測X線照射前后多藥耐藥基因(multidrugresistance gene，MDR1)及其編碼產物P糖蛋白(P-glyeoprotein，P-gp)、多藥耐藥相關蛋白基因(multidrug resistance-associated protein gene，MRP gene)及其編碼產物多藥耐藥相關蛋白(multidrug res

3、istance-associated protein，MRP)的表達隨時間的變化情況，探討照射與鼻咽鱗癌CNE-1多藥耐藥性的關系。 方法：對人鼻咽鱗癌CNE-1細胞進行體外培養(yǎng)，待細胞進入指數生長期后模擬臨床放療方法進行X射線常規(guī)分割照射，總劑量20Gy(2Gy/天/次，5次/周，持續(xù)2周)。分別于X射線照射前、照射開始的第7、14、21、28和35天收取標本進行檢測。利用MTT法檢測X射線照射前后順鉑(DDP)對CNE-1

4、細胞的半數抑制率(inhibitory concentraion of drug that reduces cell survival by 50﹪，IC50)，RT-PCR．檢測X射線照射前后CNE-1細胞MDRl和MRP基因的表達，Western blotting方法檢測X射線照射前后CNE-1細胞P-gp和MRP的表達。 結果：MTT法檢測X射線照射前CNE-1細胞的IC<,50>值為1.11±0.05μg/mll，照射

5、開始第7、14、21、28和35天的IC<,50>值均比照射前增高，其值分別為1.57±0.12μg/ml、2.65±0.15μg/ml、4.33±0.17μg/ml、3.72±0.19μg/ml和2.76±0.20μg/ml(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義，其IC<,50>值在第21天最大，第21天后呈回落趨勢。RT-PCR檢測X射線照射前CNE-1細胞MDRl和MRP基因的半定量值分別為0.47±0.02和0.41±0.02，照射

6、開始第7、14、21、28和35天MDRl和MRP基因的表達比照射前明顯增高，MDR1值分別為0.60±0.03、0.90±0.08、1.03±0.09、0.80±0.05和0.67±0.02，MRP基因值分別為0.63±0.05、1.01±0.06、1.33±0.08、0.99±0.05和0.75±0.03(.P<0.05)。Western blotting檢測x射線照射前CNE-1細胞P-gp和MRP的半定量值分別為15.55±1.

7、02和55.48±1.91，照射開始第14、21、28和35天P-gp表達比照射前明顯增高，其值分別為26.98±1.62、35.12±2.11、29.85±1.83和23.35±1.84，第7、14、21、28和35天MRP表達比照射前明顯增高，其值分別為71.13±3.4、93.60±3.95、100.75±3.67、106.17±4.06和89.12±3.05(P<0.05)。X射線照射后多藥耐藥基因和蛋白的表達隨時間均呈現(xiàn)先增高

8、后緩慢回落的趨勢：結論：X射線照射前CNE.1細胞已存在較弱的耐藥基因(MDR.1、MRP基因)和耐藥蛋白(P-gp、MRP)的表達，這說明鼻咽鱗癌CNE-1細胞已存在一定程度的原發(fā)性耐藥；X射線照射后鼻咽鱗癌CNE-1細胞對化療藥物順鉑(DDP)的敏感性降低，對順鉑產生抵抗；X射線照射后鼻咽鱗癌CNE-1細胞多藥耐藥基因(MDR1)及其編碼產物P糖蛋白(P-gp)、多藥耐藥相關蛋白基因(MRP基因)及其編碼產物多藥耐藥相關蛋白(MRP