X線照射對(duì)人鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞株耐藥基因及其蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：目前對(duì)惡性腫瘤主要采取綜合治療的原則，放射治療和化學(xué)治療的結(jié)合是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的一種綜合治療模式。二者的結(jié)合應(yīng)用能提高腫瘤療效已在臨床中得到證實(shí)，然而臨床治療中我們也可以觀察到放射治療后，腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性下降，其機(jī)理尚不清楚。放射治療會(huì)引起腫瘤細(xì)胞多藥耐藥基因及其蛋白的過度表達(dá)可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性降低的主要原因之一。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床常規(guī)分割放療方法對(duì)鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞進(jìn)行分次X射線照射，檢測(cè)X線照射前與

2、照射后一段時(shí)間內(nèi)鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑(cisplatin，DDP)敏感性的變化，同時(shí)檢測(cè)X線照射前后多藥耐藥基因(multidrugresistance gene，MDR1)及其編碼產(chǎn)物P糖蛋白(P-glyeoprotein，P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白基因(multidrug resistance-associated protein gene，MRP gene)及其編碼產(chǎn)物多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrug res

3、istance-associated protein，MRP)的表達(dá)隨時(shí)間的變化情況，探討照射與鼻咽鱗癌CNE-1多藥耐藥性的關(guān)系。 方法：對(duì)人鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，待細(xì)胞進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期后模擬臨床放療方法進(jìn)行X射線常規(guī)分割照射，總劑量20Gy(2Gy/天/次，5次/周，持續(xù)2周)。分別于X射線照射前、照射開始的第7、14、21、28和35天收取標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。利用MTT法檢測(cè)X射線照射前后順鉑(DDP)對(duì)CNE-1

4、細(xì)胞的半數(shù)抑制率(inhibitory concentraion of drug that reduces cell survival by 50﹪，IC50)，RT-PCR．檢測(cè)X射線照射前后CNE-1細(xì)胞MDRl和MRP基因的表達(dá)，Western blotting方法檢測(cè)X射線照射前后CNE-1細(xì)胞P-gp和MRP的表達(dá)。 結(jié)果：MTT法檢測(cè)X射線照射前CNE-1細(xì)胞的IC<,50>值為1.11±0.05μg/mll，照射

5、開始第7、14、21、28和35天的IC<,50>值均比照射前增高，其值分別為1.57±0.12μg/ml、2.65±0.15μg/ml、4.33±0.17μg/ml、3.72±0.19μg/ml和2.76±0.20μg/ml(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其IC<,50>值在第21天最大，第21天后呈回落趨勢(shì)。RT-PCR檢測(cè)X射線照射前CNE-1細(xì)胞MDRl和MRP基因的半定量值分別為0.47±0.02和0.41±0.02，照射

6、開始第7、14、21、28和35天MDRl和MRP基因的表達(dá)比照射前明顯增高，MDR1值分別為0.60±0.03、0.90±0.08、1.03±0.09、0.80±0.05和0.67±0.02，MRP基因值分別為0.63±0.05、1.01±0.06、1.33±0.08、0.99±0.05和0.75±0.03(.P<0.05)。Western blotting檢測(cè)x射線照射前CNE-1細(xì)胞P-gp和MRP的半定量值分別為15.55±1.

7、02和55.48±1.91，照射開始第14、21、28和35天P-gp表達(dá)比照射前明顯增高，其值分別為26.98±1.62、35.12±2.11、29.85±1.83和23.35±1.84，第7、14、21、28和35天MRP表達(dá)比照射前明顯增高，其值分別為71.13±3.4、93.60±3.95、100.75±3.67、106.17±4.06和89.12±3.05(P<0.05)。X射線照射后多藥耐藥基因和蛋白的表達(dá)隨時(shí)間均呈現(xiàn)先增高

8、后緩慢回落的趨勢(shì)：結(jié)論：X射線照射前CNE.1細(xì)胞已存在較弱的耐藥基因(MDR.1、MRP基因)和耐藥蛋白(P-gp、MRP)的表達(dá)，這說明鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞已存在一定程度的原發(fā)性耐藥；X射線照射后鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑(DDP)的敏感性降低，對(duì)順鉑產(chǎn)生抵抗；X射線照射后鼻咽鱗癌CNE-1細(xì)胞多藥耐藥基因(MDR1)及其編碼產(chǎn)物P糖蛋白(P-gp)、多藥耐藥相關(guān)蛋白基因(MRP基因)及其編碼產(chǎn)物多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP