轉(zhuǎn)染RIZ1基因后食管鱗癌細(xì)胞株基因表達(dá)譜的變化.pdf

1、目的:
　　觀察轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白結(jié)合鋅指結(jié)構(gòu)基因1（RIZ1基因）后，食管鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞株TE13基因表達(dá)譜的改變，探討RIZ1基因在食管鱗癌中可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)食管鱗癌TE13細(xì)胞株，1∶10傳代后培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)/RIZ1真核表達(dá)載體。
　　2.確認(rèn)轉(zhuǎn)染成功后，應(yīng)用Agilent人類全基因表達(dá)譜基因芯片篩選轉(zhuǎn)染前

2、后的差異基因（差異倍數(shù)foldchange≥2或≤0.5），對(duì)差異基因進(jìn)行基因本體論、通路分析。
　　3.隨機(jī)選取部分差異基因，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)法檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染RIZ1基因后，TE13細(xì)胞株中相應(yīng)mRNA表達(dá)水平，驗(yàn)證與基因芯片結(jié)果的一致性。
　　結(jié)果:
　　RIZ1基因在TE13細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染成功，基因芯片結(jié)果

3、顯示RIZ1基因轉(zhuǎn)染食管鱗癌細(xì)胞株TE13后引起的差異基因共2123個(gè)，其中上調(diào)960個(gè)，下調(diào)1163個(gè)，RT-PCR法驗(yàn)證差異基因mRNA表達(dá)水平與芯片結(jié)果一致率為88.9％(8/9)。對(duì)差異基因功能進(jìn)行分析顯示，差異基因主要與細(xì)胞發(fā)育、病毒復(fù)制的監(jiān)管、淋巴細(xì)胞共刺激、免疫系統(tǒng)發(fā)育等功能簇相關(guān)。差異基因的信號(hào)通路主要集中于細(xì)胞因子受體互相作用、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β信號(hào)途徑、促分裂素原活化蛋白激酶通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路等。