SiRNA抑制EGFR基因表達(dá)對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株Eca109放射敏感性的影響.pdf

1、目的：探討用小干擾RNA（siRNA）抑制EGFR基因表達(dá)以提高食管鱗癌細(xì)胞Eca109的放射敏感性。
　　方法：化學(xué)合成3種序列EGFR siRNA(EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3)，設(shè)隨機(jī)序列陽性SiRNA組、隨機(jī)序列陰性siRNA組、空白對(duì)照組，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)入 Eca109細(xì)胞。以 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，采用 RT-PCR和Western blot檢測(cè)干擾前后的食管癌Eca10

2、9細(xì)胞EGFRmRNA和蛋白表達(dá)。用細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析EGFR siRNA聯(lián)合X線照射對(duì)Eca109細(xì)胞的放射敏感性影響。
　　結(jié)果：EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞后的EGFR mRN A的陽性表達(dá)率為26.74％、9.52%、4.61%，較空白對(duì)照組的42.44%明顯下降（p<0.0001），EGFR siRNA3對(duì)Eca109細(xì)胞EGFR mRNA表達(dá)抑制率可高達(dá)8

3、5%；EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3轉(zhuǎn)染后Eca109細(xì)胞后的EGFR蛋白的陽性表達(dá)率為24.05%、34.91%、34.14%，較空白對(duì)照組的78.57%明顯下降（p<0.0001），EGFR siRNA1對(duì) Eca109細(xì)胞 EGFR蛋白表達(dá)抑制效率可高達(dá)72.84%；CCK8實(shí)驗(yàn)顯示siRNA3干擾EGFR后Eca109細(xì)胞生長受到抑制，增殖抑制率為28.2％；成克隆分析的 EGFR siR