RNA干擾抑制RPA70表達對食管癌細胞放射敏感性影響的體外實驗研究.pdf

1、目的：觀察RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細胞中的表達情況；觀察RPA70基因特異性反義寡核苷酸(AS-RPA-70)對食管癌TE-1細胞中RPA70的mRNA及其蛋白表達的影響；探討特異性阻斷RPA70基因表達后聯(lián)合不同劑量的X線照射對食管癌TE-1細胞增殖、凋亡的影響。
　　方法：使用食管癌TE-1細胞株，利用RT-PCR和免疫組化法分別檢測該細胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表達情況；使用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)，采

2、用瞬時轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染RPA70特異性反義寡核苷酸(AS-RPA-70)及陰性對照寡核苷酸于食管癌TE-1細胞中，設(shè)實驗組(RPA70基因特異性反義寡核苷酸)、陰性對照組(陰性對照寡核苷酸)、Mock組(加入轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000)及空白對照組(只加入無血清培養(yǎng)基Opti-MEM)，在24、48、72、96小時四個轉(zhuǎn)染時間點進行觀察；使用RT-PCR、實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法分別檢測各組、各時間段食管癌

3、TE-1細胞中RPA70的mRNA及其蛋白的表達情況；用CCK-8法、流式細胞儀分別檢測AS-RPA-70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合輻射對食管癌TE-1細胞增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果：RPA70的mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細胞中均有表達；RT-PCR、qRT-PCR法結(jié)果表明實驗組轉(zhuǎn)染后RPA70的mRNA含量在72h達到最低，Westernblot法結(jié)果表明實驗組轉(zhuǎn)染后RPA70的蛋白表達在96h達到最低，其他各對照組轉(zhuǎn)染后RPA

4、70的mRNA及其蛋白含量無明顯改變；細胞增殖及凋亡分析結(jié)果示AS-RPA-70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合放射可明顯抑制食管癌TE-1細胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡，實驗組的細胞抑制率和凋亡率明顯高于各對照組。(P<0.05)
　　結(jié)論：1.食管癌TE-1細胞中存在RPA70的mRNA及其蛋白的表達
　　2.AS-RPA-70能夠有效地抑制食管癌TE-1細胞的mRNA及其蛋白的表達
　　3.AS-RPA-70聯(lián)合輻射可明顯抑制食管癌TE