H2AX、STAT1 RNAi對(duì)體外食管癌細(xì)胞放射敏感性和細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的:觀察RNA干擾技術(shù)下調(diào)食管癌細(xì)胞中基因H2AX和STAT1的蛋白表達(dá)后,對(duì)照射后食管癌細(xì)胞周期和細(xì)胞核內(nèi)斑點(diǎn)形成的影響,進(jìn)而影響食管癌細(xì)胞放射敏感性。
　　 方法:①采用MTT法和克隆形成實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)了ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S食管癌細(xì)胞細(xì)胞增殖和放射敏感性間的差別;②采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)4Gy照射后1h、2h、12h、24h和48h,不同的ECA109、ECA109-N、ECA10

2、9-H、ECA109-S細(xì)胞周期和凋亡的變化;③采用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)H2AX、STAT1斑點(diǎn)形成的變化情況。
　　 結(jié)果:①H2AX和STAT1 shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)食管癌細(xì)胞ECA109的增殖活性未見(jiàn)明顯影響,p＞0.05。②克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ECA109細(xì)胞的接種效率為77％,ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S細(xì)胞的D0值分別為2.98Gy、3.02Gy、1.96Gy、2.03Gy,

3、SF2值分別為0.88、0.88、0.59、0.83,H2AX和STAT1 shRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的放射敏感性明顯高于未轉(zhuǎn)染組及空載體轉(zhuǎn)染組(p＜0.05)。③照射后1～2h,H2AX和STAT1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞G0/G1期、G2/M期和S期的百分率未見(jiàn)明顯變化。繼續(xù)觀察至12h,發(fā)現(xiàn)未照射的ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S這4組細(xì)胞中G0/G1期、G2/M期和S期的比例均未見(jiàn)明顯變化(p＞0.0

4、5)。而4Gy照射后,ECAl09和ECA109-N組G0/G1期比例明顯較未照射組降低(p＜0.05),而ECA109-H、ECA109-S照射組G0/G1期比例明顯低于相應(yīng)未照射組(p＜0.05),但高于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。4Gy照射后ECA109、ECA109-N組G2/M期比例明顯高于相應(yīng)未照射組(p＜0.05),而ECA109-H、ECA109-S照射組G2/M期比例與相應(yīng)的未照射組比較未見(jiàn)明

5、顯差別(p＞0.05)。4Gy照射后ECA109、ECA109-N組S期比例明顯較未照射組升高(p＜0.05),ECA109-H、ECA109-S照射組S期比例明顯高于相應(yīng)未照射組(p＜0.05),但與ECA109、ECA109-N照射組比較未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05)。各組細(xì)胞之間凋亡的變化未見(jiàn)明顯差別(p＞0.05)。
　　 繼續(xù)觀察至24h,發(fā)現(xiàn)未照射的ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S這4

6、組細(xì)胞中G0/G1期、G2/M期和S期的比例均未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05)。而4Gy照射后,ECA109和ECA109-N組G0/G1期比例明顯較未照射組降低(p＜0.05),而ECA109-H和ECA109-S照射組G0/G1期比例明顯低于相應(yīng)未照射組(p＜0.05),但高于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。4Gy照射后ECA109、ECA109-N組G2/M期比例明顯較未照射組升高(p＜0.05),而ECA109

7、-H、ECA109-S照射組G2/M期比例明顯低于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05),但仍高于相應(yīng)未照射組(p＜0.05)。4Gy照射后ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S這4組細(xì)胞S期比例未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05)。ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S未照射組凋亡率未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05),4Gy照射后ECA109、ECA109-N組凋亡率與未照射組比

8、較未見(jiàn)明顯差別(p＞0.05),ECA109-S照射組凋亡率與ECA109、ECA109-N照射組比較未見(jiàn)明顯差別(p＞0.05),而ECA109-H照射組凋亡率明顯高于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。
　　 繼續(xù)觀察至48h,發(fā)現(xiàn)未照射的ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S這4組細(xì)胞中G0/Ga期、G2/M期和S期的比例均未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05)。而4Gy照射后,ECA1

9、09和ECA109-N組G0/G1期比例明顯較未照射組降低(p＜0.05),而ECA109-H、ECA109-S照射組G0/G1期比例明顯高于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。4Gy照射后,ECA109和ECA109-N組G2/M期比例明顯較未照射組升高(p＜0.05),而ECA109-H、ECA109-S照射組GE/M期比例明顯低于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。4Gy照射后ECA109、EC

10、A109-N、ECA109-H、ECA109-S這4組細(xì)胞S期比例未見(jiàn)明顯變化(p＞0.05)。ECA109、ECA109-N、ECA109-H、ECA109-S未照射組凋亡率無(wú)明顯變化,4Gy照射后ECA109、ECA109-N組凋亡率與未照射組比較未見(jiàn)明顯差別(p＞0.05),ECA109-H、ECA109-S照射組凋亡率明顯高于ECA109、ECA109-N照射組(p＜0.05)。④ECA109、ECA109-N、ECA109-H