漢防已甲素對人食管癌細胞株Eca-109放射增敏研究.pdf

1、目的：研究漢防己甲素(Tet)與γ射線對人食管癌細胞株Eca-109的放射增敏作用,并探討其放射增敏的機制。
　　 方法：采用MTT法測定不同濃度Tet(10-60μM)作用于人食管癌細胞株Eca-10948h和72h的抑制率；克隆形成分析法測定Tet對單純照射組(γ射線吸收劑量分別為:0、2、4、6、8、10Gy)和照射+Tet組(與單純照射組同時同等劑量照射后后加人2μM Tet)各組人食管癌細胞株Eca-109的放射敏感性

2、的影響；流式細胞術(shù)分析空白對照組(不照射、不加藥)、照射組(4Gy)、照射+Tet組(4Gy+0.2μM Tet、4Gy+2μM Tet)、Tet組(2μM Tet)各組照射后細胞周期的再分布；Western Blotting分析空白對照組(不照射、不加藥)、照射組(4Gy)、照射+Tet組(4Gy+0.2μM Tet、4Gy+2μM Tet)、Tet組(2μM Tet)各組細胞周期相關(guān)蛋白的表達；分裂指數(shù)法分析Tet對空白對照組(不照

3、射、不加藥)、照射組(4Gy)、照射+Tet組(4Gy+2μM Tet)三組細胞照射后細胞分裂的影響。
　　 結(jié)果： MTT結(jié)果顯示,Eca-109細胞經(jīng)不同濃度(10-60μM)Tet處理48h和72h,對細胞的抑制作用呈劑量-時間依賴性。在Eca-109細胞中,兩組細胞在不同劑量照射下克隆形成率分別為:γ射線組(0-10Gy):(100±0.25)％、(90.61±1.34)％、(66.34±1.43)％、(51.0±1.3

4、5)％、(28.83±0.81)％、(10.28±1.60)％；γ射線+Tet2μM組(0-10Gy):(99.6±0.30)％、(89.28±1.33)％、(55.50±1.25)％、(48.72+.094)％、(10.58±1.12)％、(10.58±1.12)％、(10.28±1.60)％、(5.83±0.97)％,結(jié)果顯示隨著γ射線劑量的增加,細胞克隆形成率逐漸降低。與其它照射劑量相比,從4Gy照射后,γ射線組和γ射線+Tet2

5、μM組這兩組克隆形成率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果表明,Tet能顯著增加γ射線的殺傷作用,其增敏比為1.43。γ射線照射后,Eca-109細胞各組G2／M期細胞數(shù)分別為:對照組(14.86±0.74)％、Tet2μM組(08.09±1.42)％、4Gyγ射線組(20.58±0.83)％、4Gyγ射線+0.2μM組(19.66±1.15)％、4Gyγ射線+2μM組(18.08±0.72)％。4Gyγ射線+0.2μM組與γ射

6、線4Gy比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),4Gyγ射線+2μM組與4Gyγ射線組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果表明,細胞明顯阻滯于G2期,而Tet可以降低這種阻滯。Western bloting實驗結(jié)果顯示,Eca-109細胞受4Gyγ射線照射后,CyclinB1的蛋白表達水平明顯降低,在加入Tet后,CyclinB1、Cdc2的蛋白表達明顯增加,其中尤以2μ M時最為顯著。CyclinB1各組蛋白表達水平分別為:對

7、照組(0.8820±0.0260)、Tet2μ M組(1.2915±0.0479)、4Gyγ射線組(0.8031±0.0307)、4Gyγ射線+0.2μ M組(0.9362±0.0190)、4Gyγ射線+2μM組(1.0937±0.1047),4Gyγ射線+2μ M組與4Gyγ射線組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；Cdc2各組蛋白表達水平分別為:對照組(0.1355±0.0050)、Tet2μ M組(0.1949±0.0049)

8、、4Gyγ射線組(0.1915±0.0122)、4Gyγ射線+0.2μ M組(0.2203±0.0137)、γ射線4Gy+2μ M組(0.2577±0.0112),4Gyγ射線+2μ M組與4Gyγ射線組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Tet誘導(dǎo)各組細胞分裂指數(shù):對照組(5.58±0.52)％、4Gyγ射線照射組(2.78±0.28)％、4Gyγ射線照射+Tet2μM組(13.94±0.47)％,三組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<

9、0.01)。結(jié)果顯示照射后細胞分裂指數(shù)明顯降低,說明CyelinB1／Cdc2復(fù)合物受到抑制,而在使用Tet后,其分裂指數(shù)又明顯上升,表明Tet可以逆轉(zhuǎn)γ射線對Cyclin B1與Cdc2蛋白的表達的抑制作用,從而促使阻滯于G2期的Eca-109細胞進人M期。
　　 結(jié)論： Tet對人食管癌Eca-109細胞的增殖有抑制作用,并呈劑量-時間依賴性；Tet能顯著增加γ射線對人食管癌細胞的殺傷作用,其作用機制可能與Tet去除放射引起